โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) ย่อมาจากวิธีการวิเคราะห์ที่ขาดไม่ได้ที่ใช้ในหลายภาคส่วนเพื่อแยกลักษณะและวัดองค์ประกอบภายในส่วนผสมที่ซับซ้อน
พื้นฐานของเทคโนโลยี HPLC
HPLC แสดงให้เห็นถึงเทคนิคที่ปรับตัวได้สูงทำให้สามารถตรวจสอบสารที่หลากหลายได้อย่างพิถีพิถัน
รากฐานทางทฤษฎีที่จำเป็น
การเรียนรู้การดำเนินงาน HPLC ต้องใช้ความคุ้นเคยกับหลักการพื้นฐาน
พลวัตแยก
ความสามารถหลักของเทคนิคอยู่ในการแยกโมเลกุล
การโต้ตอบเฟส
ตัวทำละลายเฟสเคลื่อนที่เคลื่อนย้ายวิเคราะห์ผ่านคอลัมน์การแยกในขณะที่สารตั้งต้นที่อยู่กับที่ (โดยทั่วไปแล้ววัสดุที่เป็นของแข็งหรือที่ดัดแปลงจากพื้นผิว) จะประกอบกับส่วนประกอบตัวอย่าง
ส่วนประกอบเครื่องมือที่สำคัญ
เครื่องมือ HPLC รวมองค์ประกอบสำคัญหลายอย่างที่ทำงานร่วมกันเพื่อให้แน่ใจว่าผลลัพธ์ที่ถูกต้อง
กลไกการส่งของเหลว
ปั๊มที่มีความแม่นยำรักษาอัตราการไหลและความดันของตัวทำละลายคงที่
ตัวอย่างพอร์ตแนะนำ
ระบบการฉีดจะแนะนำปริมาณตัวอย่างนาทีอย่างแม่นยำในกระแสการเคลื่อนที่
คอลัมน์แยก
คอลัมน์ที่บรรจุซึ่งมีสื่อที่อยู่กับที่ทำหน้าที่เป็นไซต์แยกหลัก
ระบบตรวจจับ
หน่วยตรวจจับระบุและหาปริมาณสารประกอบที่ถูกแยกออกจากกัน
หน่วยประมวลผลข้อมูล
ซอฟต์แวร์ขั้นสูงแปลงสัญญาณเครื่องตรวจจับเป็นข้อมูลโครมาโตกราฟี
รูปแบบวิธีการ HPLC
มีเทคนิค HPLC ที่หลากหลายแต่ละแบบปรับให้เหมาะสมสำหรับความต้องการการวิเคราะห์เฉพาะ
วิธีการย้อนกลับเฟส
วิธีการนี้ใช้ขั้นตอนที่ไม่เข้ากับระบบที่ไม่เข้ากับระบบพร้อมเฟสมือถือขั้วโลก
เทคนิคเฟสปกติ
ใช้เฟสที่อยู่กับที่ขั้วกับตัวทำละลายที่ไม่ได้เป็นโพลาร์วิธีนี้มีความเชี่ยวชาญในการแยกสารประกอบน้ำที่ชอบน้ำและโมเลกุลอินทรีย์บางอย่าง
การเปลี่ยนแปลงการแลกเปลี่ยนไอออน
เทคนิคนี้แยกสปีชีส์ที่มีประจุออกจากการปฏิสัมพันธ์ไฟฟ้าสถิตกับสื่อที่อยู่กับที่
วิธีการยกเว้นขนาด
การแยกโมเลกุลโดยปริมาตรอุทกพลศาสตร์วิธีนี้จะทำให้โมเลกุลขนาดใหญ่ขึ้นก่อน
โปรโตคอลการปฏิบัติงานมาตรฐาน
การดำเนินการวิเคราะห์ HPLC เป็นไปตามลำดับขั้นตอนที่กำหนดไว้
การปรับสภาพตัวอย่าง
ก่อนการวิเคราะห์ตัวอย่างจะต้องมีการสลายตัวในตัวทำละลายหรือการกรองที่เหมาะสมเพื่อลบสสารอนุภาค
การฉีดและแยก
หลังจากการเตรียมการตัวอย่างจะป้อนสตรีมเฟสมือถือโดยการย้ายผ่านคอลัมน์การแยกที่เกิดการแบ่งพาร์ติชันส่วนประกอบ
การตรวจจับและการตีความข้อมูล
สารประกอบ Eluting ลงทะเบียนกับระบบตรวจจับสร้างข้อมูลการวิเคราะห์
พารามิเตอร์การเพิ่มประสิทธิภาพ
ตัวแปรหลายตัวมีผลต่อคุณภาพเอาต์พุต HPLC
ลักษณะประสิทธิภาพของคอลัมน์
ประสิทธิภาพของคอลัมน์ที่กำหนดโดยพารามิเตอร์คุณภาพและพารามิเตอร์มิติส่งผลกระทบอย่างยิ่งต่อความสามารถในการแยก
การเพิ่มประสิทธิภาพเฟสมือถือ
องค์ประกอบของตัวทำละลายส่งผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อการแบ่งพาร์ติชันแบบผสม
กฎระเบียบความร้อน
อุณหภูมิมีผลต่อความหนืดเฟสมือถือและการเปลี่ยนแปลงของการโต้ตอบเฟส
การพิจารณาอัตราการไหล
ความเร็วเฟสเคลื่อนที่มีผลต่อระยะเวลาการแยกและความละเอียด
แอปพลิเคชันที่ใช้งานได้จริง
ความสามารถในการปรับตัวของ HPLC ทำให้มันมีค่ามากในหลายสาขาวิชาแก้ปัญหาการวิเคราะห์ที่หลากหลาย
การประกันคุณภาพยา
การพัฒนายาและการควบคุมคุณภาพใช้ HPLC อย่างกว้างขวางสำหรับการประเมินความบริสุทธิ์การทดสอบเสถียรภาพและการวิเคราะห์สูตรเพื่อให้เป็นไปตามข้อกำหนดด้านกฎระเบียบ
การตรวจสอบด้านสิ่งแวดล้อม
HPLC อำนวยความสะดวกในการตรวจหาสารปนเปื้อนด้านสิ่งแวดล้อมรวมถึงสารกำจัดศัตรูพืชและโลหะที่เป็นพิษในเมทริกซ์ต่างๆสนับสนุนความพยายามในการป้องกันระบบนิเวศ
แอพพลิเคชั่นอุตสาหกรรมอาหาร
โปรแกรมความปลอดภัยด้านอาหารใช้ HPLC สำหรับการตรวจคัดกรองสารเติมแต่งการตรวจจับสารปนเปื้อนและการวิเคราะห์ทางโภชนาการเพื่อให้แน่ใจว่าการคุ้มครองผู้บริโภคและการปฏิบัติตามกฎระเบียบ
การตรวจสอบทางชีวการแพทย์
นักวิจัยใช้ HPLC เพื่อศึกษา macromolecules ทางชีวภาพและเมตาโบไลต์พัฒนาความเข้าใจเกี่ยวกับกระบวนการทางสรีรวิทยาและกลไกโรค
ความก้าวหน้าทางเทคโนโลยี
นวัตกรรม HPLC อย่างต่อเนื่องให้การปรับปรุงความเร็วความไวและความเป็นมิตรกับผู้ใช้
ระบบประสิทธิภาพสูงเป็นพิเศษ
เทคโนโลยี UHPLC ใช้ขนาดอนุภาคที่ลดลงและแรงกดดันที่สูงขึ้นเพื่อให้เกิดการแยกความละเอียดสูงอย่างรวดเร็วเหมาะสำหรับการวิเคราะห์ที่สำคัญหรือซับซ้อน
เทคนิคคู่
การรวมกันของสเปกโตรเมตรี HPLC-mass ขยายขีดความสามารถในการตรวจจับซึ่งเป็นเครื่องมือที่ทรงพลังสำหรับการวิเคราะห์ผสมที่ซับซ้อน
การรวมระบบอัตโนมัติ
ระบบร่วมสมัยรวมฟังก์ชั่นอัตโนมัติและซอฟต์แวร์ที่ซับซ้อนลดการแทรกแซงด้วยตนเองและลดข้อผิดพลาดในการดำเนินงาน
Persee: HPLC Solutions Provider
ห้องปฏิบัติการต้องการเครื่องมือและการสนับสนุน HPLC ที่เชื่อถือได้ บริการ. เพอร์สซัพพลายเออร์ที่มีชื่อเสียงมอบระบบ HPLC ที่มีความแม่นยำด้วยการสร้างที่มีความแม่นยำพร้อมการก่อสร้างที่แข็งแกร่ง พันธมิตรที่เชื่อถือได้ สำหรับห้องปฏิบัติการวิเคราะห์
คำถามที่พบบ่อย
ตัวอย่างประเภทใดที่เข้ากันได้กับ HPLC?
HPLC รองรับกลุ่มตัวอย่างมากมายรวมถึงสารประกอบยาตัวอย่างสิ่งแวดล้อมผลิตภัณฑ์อาหารและวัสดุชีวภาพเช่นโปรตีนหรือผลิตภัณฑ์เมตาบอลิซึม
วิธีเลือกวิธีการ HPLC ที่เหมาะสมอย่างไร
การเลือกวิธีการพิจารณาลักษณะการวิเคราะห์เช่นขั้วและประจุ
ทำไมต้องเน้นการเตรียมตัวอย่าง?
การปรับสภาพตัวอย่างที่เหมาะสมช่วยให้มั่นใจได้ถึงความเข้ากันได้ของระบบป้องกันความเสียหายของคอลัมน์และปรับปรุงความแม่นยำของผลลัพธ์ผ่านการกำจัดอนุภาคและการละลายที่เหมาะสม