แอปพลิเคชัน

วัตถุประสงค์การทดลอง
โดยการทดลองเรียนรู้หลักการพื้นฐานของการวิเคราะห์โครมาโตกราฟีและการทำงานพื้นฐานของเครื่องมือและเข้าใจกระบวนการวิเคราะห์ข้อมูล
เรียนรู้เกี่ยวกับวิธีการเชิงปริมาณโครมาโตกราฟีและเปรียบเทียบข้อดีและข้อเสียของวิธีการต่าง ๆ

บทนำ HPLC
ความเร็วสูง: HPLC ใช้อุปกรณ์ฉีดแรงดันสูงอัตราการไหลเพิ่มขึ้นอย่างมากและความเร็วในการวิเคราะห์นั้นเร็วมากโดยทั่วไปเพียงไม่กี่นาที
ประสิทธิภาพ: อนุภาคฟิลเลอร์นั้นดีและปกติการเคลือบในเฟสคงที่นั้นสม่ำเสมอและความต้านทานการถ่ายโอนมวลมีขนาดเล็กดังนั้นประสิทธิภาพของคอลัมน์จึงสูงมาก
ความไวสูง: เครื่องตรวจจับมีความอ่อนไหวอย่างยิ่ง: UV- 10-9G, เครื่องตรวจจับการเรืองแสง- 10-11G

เปรียบเทียบ HPLC กับ GC

วัตถุและขอบเขตของการวิเคราะห์: การวิเคราะห์ GC นั้น จำกัด อยู่ที่ก๊าซและสารประกอบที่มีความเสถียรต่ำซึ่งคิดเป็นเพียง 20% ของสารอินทรีย์ทั้งหมด

ทางเลือกของเฟสมือถือ: GC ใช้ก๊าซ“ เฉื่อย” แบบ จำกัด เป็นตัวเลือกที่ จำกัด เป็นเฟสมือถือมีผลกระทบเพียงเล็กน้อยต่อส่วนประกอบ

อุณหภูมิการทำงาน: GC ต้องการอุณหภูมิสูง
ฟิลด์แอปพลิเคชัน
เนื่องจากความไวสูงความแม่นยำเชิงปริมาณและเหมาะสำหรับการวิเคราะห์ส่วนประกอบที่ไม่ระเหยและความร้อนการวิเคราะห์การแยก HPLC นั้นมีความหลากหลายในการวิจัยอุตสาหกรรมและวิทยาศาสตร์โดยเฉพาะอย่างยิ่งในชีววิทยาและการแพทย์

โครงสร้างและหลักการ HPLC

รูปที่ 1 โครงสร้าง HPLC

HPLC ประกอบด้วยระบบปั๊มระบบฉีดระบบแยกเครื่องตรวจจับและระบบประมวลผลข้อมูล

ระบบแช่แรงดันสูง
1) ขวดเฟสมือถือ: ขวดแก้ว 1-2L พร้อมตัวกรองตัวทำละลาย (อัลลอย Ni) รูขุมขนของมันจะอยู่ที่ประมาณ 2 μmป้องกันไม่ให้อนุภาคจากการสูบน้ำ
2) Degasser: degassing อัลตราโซนิกหรือการทำความร้อนสูญญากาศ

3) ปั๊มแรงดันสูง: ข้อกำหนดสำหรับปั๊มแช่: การปิดผนึกที่ดีการไหลที่มั่นคงโดยไม่มีการไหลเข้าช่วงที่ปรับได้กว้างและความต้านทานการกัดกร่อน

ระบบฉีด

หัวฉีดด้วยตนเองหรืออัตโนมัติ

รูปที่ 2 หลักการฉีด

ระบบแยกคอลัมน์

รูปที่ 2 หลักการแยก

รูปที่ 3 UVD

หลักการแยก
กระบวนการ Chromatographic: ในระบบที่มีสองเฟสที่ไม่สามารถมองเห็นได้คือเฟสมือถือและเฟสคงที่ส่วนประกอบที่สาม (เช่นตัวถูกละลายหรือตัวดูดซับ) เป็นการกระจายตัวทางเลือกอย่างต่อเนื่องระหว่างสองเฟส
เนื่องจากความแตกต่างในคุณสมบัติของเฟสเคลื่อนที่เฟสคงที่และส่วนผสมตัวถูกละลายส่วนประกอบจะแสดงพฤติกรรมของโครมาโตกราฟีที่แตกต่างกันในระหว่างกระบวนการโครมาโตกราฟีเพื่อให้ส่วนประกอบถูกแยกออกจากกัน

ปณิธาน

ความละเอียดของการชะล้างเป็นตัวชี้วัดเชิงปริมาณว่ายอดเขาสองจุดสามารถแตกต่างกันได้ในการแยกโครมาโตกราฟี

ปัจจัยการแก้ไข
การวิเคราะห์เชิงปริมาณของโครมาโตกราฟีขึ้นอยู่กับว่าปริมาณของส่วนประกอบนั้นเป็นสัดส่วนกับพื้นที่สูงสุด：

ปัจจัยการแก้ไขน้ำหนัก：

วิธีการเชิงปริมาณ
วิธีมาตรฐานภายนอก
เส้นโค้งการสอบเทียบสามารถสร้างได้ตามสมการต่อไปนี้:

นำไปใช้กับการวิเคราะห์ปกติ
ข้อดี: การทำงานและการคำนวณที่ง่าย
การขาดแคลน: ความถูกต้องของผลลัพธ์ขึ้นอยู่กับความสามารถในการทำซ้ำของการฉีดและความเสถียรของสภาพการทำงาน

วิธีมาตรฐานภายใน

เพิ่มสารบริสุทธิ์จำนวนหนึ่งลงในตัวอย่างเป็นมาตรฐานภายใน

ช่วงแอปพลิเคชัน: กำหนดส่วนประกอบหลายอย่างของตัวอย่างเท่านั้นและไม่สามารถไหลได้ยอดสูงสุดทั้งหมดของส่วนประกอบ
ข้อดี: อิทธิพลน้อยกว่าของสภาพการทำงานที่น่าสนใจและข้อ จำกัด น้อยกว่าวิธีการทำให้เป็นมาตรฐานเหมาะสมสำหรับการวิเคราะห์การติดตาม
การขาดแคลน: ไม่เหมาะสำหรับการวิเคราะห์อย่างรวดเร็ว

เข็มฉีดยา

เข็มของเข็มฉีดยา GC นั้นคมชัดและเข็มของหลอดฉีดยา LC นั้นแบน

การทดลอง

เงื่อนไขการทดลอง
1) ฉีดสารละลายมาตรฐาน10μl Mix (Methyl Paraben, Propyl Paraben, และ Butyl Paraben) ในอัตราส่วนที่แตกต่างกันของเมทานอล: น้ำ = 90:10, 80:20 และ 70:30 เพื่อทดสอบเวลาการเก็บรักษาและความละเอียดระหว่างส่วนประกอบต่าง ๆ
หมายเหตุ: ทุกครั้งที่คุณเปลี่ยนเฟสมือถือคุณต้องรอประมาณ 5 นาทีเพื่อปรับสมดุลระบบโครมาโตกราฟี (ทั้งสัญญาณและสายความดันมีความสมดุล)
2) ฉีด 10 μl Mix Solutions มาตรฐาน (Methyl Paraben, Propyl Paraben และ Butyl Paraben) ที่อัตราการไหลเฟสเคลื่อนที่ที่แตกต่างกันที่ 0.8, 1.0 และ 1.5 มล. {{url_placeholder_0}}

การวิเคราะห์เชิงคุณภาพ
ภายใต้เงื่อนไขการทดลองที่ดีที่สุดฉีด 10 ไมโครลิตรแต่ละเมทิลพาราเบน, โพรพิลพาราเบนและบิวทิลพาราเบนและเวลาเก็บรักษาของแต่ละจุดสูงสุดจะถูกบันทึกไว้

การวิเคราะห์เชิงปริมาณ
เส้นโค้งการสอบเทียบ
ภายใต้เงื่อนไขการทดลองที่ดีที่สุด 2, 5, 8, 10, 15 และ 20 μlของตัวอย่างมาตรฐานผสมถูกฉีดและวิเคราะห์และเส้นโค้งมาตรฐานถูกสร้างขึ้นโดยปริมาตรการฉีดและพื้นที่สูงสุด
จำเป็นต้องมีค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ของเส้นโค้งนี้มากกว่า 0.99

การวิเคราะห์ตัวอย่างที่ไม่รู้จัก
ฉีดตัวอย่างที่ไม่รู้จัก 10 μlเพื่อทดสอบการวิเคราะห์เชิงปริมาณโดยเส้นโค้งการสอบเทียบ

คำถาม
จากข้อมูลการทดลองหารือเกี่ยวกับความแตกต่างในวิธีการวิเคราะห์ระหว่างแก๊สโครมาโตกราฟีและโครมาโตกราฟีของเหลว
สำรวจค่าแอปพลิเคชันของการวิเคราะห์ HPLC
ไม่ว่าจะเป็นเครื่องตรวจจับ UV ที่เหมาะสมสำหรับการตรวจจับสารประกอบอินทรีย์ทั้งหมดหรือไม่?