Başvuru

Deney hedefleri
Deneylerle, kromatografik analizin temel prensiplerini ve cihazın temel çalışmasını öğrenin ve veri analizi sürecini anlayın.
Kromatografik kantitatif yöntemler hakkında bilgi edinin ve farklı yöntemlerin avantajlarını ve dezavantajlarını karşılaştırın.

HPLC Giriş
Yüksek hız: HPLC, yüksek basınçlı infüzyon ekipmanı kullanır, akış hızı büyük ölçüde artar ve analiz hızı son derece hızlıdır, sadece birkaç dakikadır;
Verimli: Dolgu parçacıkları çok ince ve düzenli, sabit fazdaki kaplama eşittir ve kütle transfer direnci küçüktür, bu nedenle kolon verimliliği çok yüksektir.
Yüksek duyarlılık: Dedektör son derece hassastır: UV-10-9G, floresan dedektörü- 10-11g.

GC ile karşılaştırma HPLC

Nesne ve analiz kapsamı: GC analizi, toplam organik maddenin sadece% 20'sini oluşturan gazlar ve düşük kaynayan stabil bileşiklerle sınırlıdır;

Mobil aşama seçimi: GC, mobil faz olarak sınırlı isteğe bağlı “inert” gaz türleri kullanır, sadece taşıma, bileşenler üzerinde küçük bir etki kullanır.

Çalışma sıcaklığı: GC yüksek sıcaklıklar gerektirir;
Uygulama alanları
Yüksek hassasiyeti, nicel doğruluğu ve uçucu olmayan ve termal olarak kararsız bileşenlerin analizi için uygun olması nedeniyle, HPLC ayırma analizi endüstriyel ve bilimsel araştırmalarda, özellikle biyoloji ve tıpta son derece çok yönlüdür.

HPLC yapısı ve prensibi

Şekil 1 HPLC yapısı

HPLC, pompa sistemi, enjeksiyon sistemi, ayırma sistemi, dedektör ve veri işleme sisteminden oluşur.

Yüksek basınçlı infüzyon sistemi
1) Mobil faz şişesi: Çözücü filtreli (NI alaşımı) 1-2L cam şişe, gözenekleri yaklaşık 2 μm'dir ve partiküllerin pompalanmasını önler.
2) DeGaser: Ultrasonik Gazetme veya Vakum Isıtma Gazbesi.

3) Yüksek basınçlı pompa: infüzyon pompası için gereksinimler: iyi sızdırmazlık, akışsız kararlı akış, geniş ayarlanabilir aralık ve korozyon direnci.

Enjeksiyon sistemi

Manuel enjektör veya otomatik sümüklü

Şekil 2 Enjeksiyon prensibi

Sütun ayırma sistemi

Şekil 2 Ayırma İlkesi

Şekil 3 UVD

Ayrılık ilkesi
Kromatografik işlem: Mobil faz ve sabit faz olan iki karışmaz fazı olan sistemlerde, üçüncü bileşen (yani çözünen veya adsorbat), iki faz arasında sürekli olarak alternatif dağılımdır.
Mobil fazın özelliğindeki farklılıklar, sabit faz ve çözünen karışım nedeniyle, bileşenler kromatografik işlem sırasında farklı kromatografik davranışlar gösterir, böylece bileşenler birbirinden ayrılır.

Çözünürlük

Bir elüsyonun çözünürlüğü, iki elüsyon zirvesinin bir kromatografik ayrılıkta ne kadar iyi farklılaşabileceğinin nicel bir ölçüsüdür.

Düzeltme faktörü
Kromatografinin kantitatif analizi, bileşen miktarının pik alanla orantılı olduğuna dayanmaktadır ：

Kilo Düzeltme Faktörü ：

Nicel yöntem
Harici standart yöntem
Kalibrasyon eğrisi aşağıdaki denklemlere göre kurulabilir:

Düzenli analize uygulandı
Avantajlar: Kolay çalışma ve hesaplama
Kıtlık: Sonuçların doğruluğu, enjeksiyonun tekrarlanabilirliğine ve çalışma koşullarının stabilitesine bağlıdır.

Dahili standart yöntem

İç standart olarak numuneye belirli miktarda saf madde ekleyin.

Uygulama Aralığı: Sadece numunenin birkaç bileşenini belirleyin ve bileşenlerin tüm pikleri akmaz
Avantajlar: Çalışma koşullarının daha az etkisi, çok önleyici ve normalleştirme yönteminden daha az kısıtlamalar, iz analizine uygun
Kıtlık: Hızlı analiz için uygun değil.

Şırınga

GC şırıngasının iğnesi keskindir ve LC şırıngasının iğnesi düzdür.

Deney

Deney koşulları
1) Metanolün farklı oranlı mobil fazlarında 10μl karışım standart çözeltileri (metil paraben, propil paraben ve butil paraben) enjekte edin: su = 90:10, 80:20 ve 70:30, çeşitli bileşenler arasındaki çözünürlük arasındaki çözünürlük, en iyi mobil fazdan daha kısa bir süre ile test, kayıt tutma süresi ve çözünürlük, en iyi mobil fazdan daha kısa bir süre olarak, en iyi mobil fazı ile en kısa sürede, en kısa sürede, en kısa sürede seçim.
Not: Mobil aşamayı her değiştirdiğinizde, kromatografik sistemi dengelemek için yaklaşık 5 dakika beklemeniz gerekir (hem sinyal hem de basınç çizgileri dengelidir).
2) 10 uL karışım standart çözeltileri (metil paraben, propil paraben ve butil paraben) enjekte 0.8, 1.0 ve 1.5 ml {{url_placeholder_0}} ve optimal mobil faz oranı enjeksiyon analizi, aynı prensip en iyi mobil faz akış hızı seçildi.

Nitel analiz
Optimal deney koşulları altında, her biri metil paraben, propil paraben ve butil paraben enjekte ve her pikin tutma süresi kaydedilir.

Kantitatif analiz
Kalibrasyon eğrisi
Optimal deney koşulları altında, karışık standart numunenin 2, 5, 8, 10, 15 ve 20 ul'sı enjekte edildi ve analiz edildi ve standart eğri enjeksiyon hacmi ve tepe alanı ile oluşturuldu.
Bu eğrinin korelasyon katsayısının 0.99'dan büyük olması gerekir.

Bilinmeyen örnek analizi
Test için 10 uL bilinmeyen numune enjekte, kalibrasyon eğrisi ile kantitatif analiz.

Soru
Deneysel verilere dayanarak, gaz kromatografisi ve sıvı kromatografisi arasındaki analiz yöntemlerindeki farklılıkları tartışın.
HPLC analizinin uygulama değerini keşfedin.
UV dedektörü tüm organik bileşiği tespit etmek için uygun olup olmadığı?