โครมาโตگراฟของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง (HPLC) เป็นเครื่องมือสำคัญสําหรับนักวิทยาศาสตร์ มันทำให้พวกเขาสามารถแยก ระบุและวัดส่วนที่แตกต่างกันของผสม เทคนิคนี้ขึ้นอยู่กับวิธีการปฏิสัมพันธ์ของโมเลกุลตัวอย่างกับของเหลว (เฟสเคลื่อนที่) และของแข็ง (เฟสคงที่) HPLC เป็นที่รู้จักกันในการให้ผลที่แม่นยำและมั่นคง นี่ทำให้มันสําคัญในหลายด้าน ตั้งแต่ยาจนถึงความปลอดภัยอาหาร แต่การได้รับข้อมูลที่มีคุณภาพคือ’ t a ได้ มันต้องการระบบ HPLC ที่ได้รับการบำรุงรักษาอย่างดี ที่ทํางานได้ดีที่สุด
คู่มือนี้ให้แผนที่ง่ายและขั้นตอนตามขั้นตอนในการค้นหาและแก้ปัญหาที่พบบ่อย การติดตามเคล็ดลับเหล่านี้จะช่วยให้คุณได้รับข้อมูลที่ดีขึ้นและปรับปรุงระบบของคุณ’ ประสิทธิภาพโดยรวม
ปัญหาทั่วไปในการดําเนินการ HPLC
การรู้สัญญาณของปัญหา เป็นขั้นตอนแรกในการแก้ไขปัญหา
เสียงรบกวนและเสียงลดลง: เสียงรบกวนของคุณอาจแสดงความเสียงสุ่ม (เสียงรบกวน) หรือความช้าและคงที่ (การเสียงลดลง) นี่สามารถซ่อนยอดเล็กๆ ได้ง่าย มันยังทำให้การได้ผลที่แม่นยำยากขึ้นมาก สาเหตุปกติคือการเคลื่อนย้ายที่สกปรก การเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิ หรือหลอดตรวจจับอ่อนแอ
การเปลี่ยนแปลงเวลาการเก็บรักษา: สารอาจจะออกไปเร็วหรือช้ากว่าที่คาดหวัง ความไม่สอดคล้องกันนี้ทำให้ผลลัพธ์ยากที่จะทำซ้ำ มัน’ มักจะเนื่องจากการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยในระยะเคลื่อนที่ของคุณ, คอลัมน์เก่า, ปั๊มที่ไม่มั่นคง, หรือการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิ
- รูปร่างสูงสุดที่ไม่ดี (Tailing, Fronting, Splitting):
- Tailing: จุดหางมีปลายยาวและชัน นี่อาจเกิดขึ้นด้วยเหตุผลหลักสองอย่าง คุณอาจฉีดตัวอย่างมากเกินไป หรือสารประกอบของคุณติดกับบรรจุคอลัมน์
- ด้านหน้า: จุดสูงสุดด้านหน้าดูถูกผลักดันไปข้างหน้า นี่เป็นสัญญาณทั่วไปว่าตัวทำละลายตัวอย่างของคุณแข็งแรงกว่าเฟสมือถือของคุณ
- การแบ่ง: จุดยอดแบ่งดูเหมือนจุดสองจุดรวมเป็นหนึ่ง นี่เป็นสัญญาณว่ามีปัญหา มันอาจเป็นทางเข้าคอลัมน์ที่อุดตันบางส่วน, ว่างในบรรจุคอลัมน์, หรือการฉีดไม่ดี
- ความผันผวนของความดันและการปิดกั้น:
- การเพิ่มขึ้นอย่างคงที่และช้า: นี่มักจะชี้ไปสู่การอุดตันค่อยๆ อนุภาคขนาดเล็กจากตัวอย่างของคุณอาจเกิดขึ้นที่ด้านหน้าของคอลัมน์ หรือบนกรอง
- การกระโดดความดันอย่างฉับพลัน: การกระโดดความดันอย่างคมชัดมักจะหมายถึงการอุดตันใหญ่ที่เพิ่งเกิดขึ้น
- ความดันลดลงหรือความไม่มั่นคง: ความดันลดลงอย่างรวดเร็วเกือบจะเป็นสัญญาณการรั่วไหล ถ้าความดันแค่กระโดดรอบ ๆ คุณอาจมีฟองอากาศในปั๊ม
การแก้ไขปัญหาอย่างเป็นระบบของส่วนประกอบ HPLC
เพื่อแก้ปัญหาได้ดี คุณต้องมีแผนที่จัดอยู่ ตรวจสอบแต่ละส่วนของระบบแต่ละส่วน
- ขั้นตอนมือถือ
นี่คือเลือดชีวิตของระบบของคุณ มันยังเป็นแหล่งปัญหาที่พบมาก
คุณภาพของตัวทำละลาย: เริ่มต้นด้วยตัวทำละลายเกรด HPLC ที่มีความบริสุทธิ์สูงเสมอ ทำให้ขั้นตอนมือถือของคุณใหม่ สิ่งสกปรกนําไปสู่สัญญาณพิเศษที่ไม่ต้องการ เช่นเสียงรบกวนพื้นฐาน หรือสูงสุดผี
ปัญหา pH และบัฟเฟอร์: pH เฟสมือถือของคุณต้องมีเสถียรภาพและถูกต้อง แม้กระทั่งการเปลี่ยนแปลงเล็ก ๆ ก็สามารถส่งผลต่อเวลาการเก็บรักษาได้อย่างมาก นอกจากนี้ ให้แน่ใจว่าบัฟเฟอร์ใด ๆ ถูกละลายและกรองก่อนใช้
การลดก๊าซ: ฟองสก๊าซเล็ก ๆ อาจทําให้เกิดปัญหาใหญ่ พวกเขานำไปสู่ความดันที่ไม่มั่นคง และสูงขึ้นในเส้นฐานของคุณ ให้แน่ใจว่าจะถอดก๊าซในเฟสมือถือของคุณได้ดีด้วยการถอดก๊าซในตัว, การปล่อยฮีเลียม, หรือโดยวางในอาบน้ำอัลตราโซนิก
- คอลัมน์ HPLC
คอลัมน์ทำงานแยกทั้งหมด สภาพของมันเป็นสิ่งสำคัญ
การมลพิษและอายุ: คอลัมน์สกปรกเมื่อใช้ ชิ้นส่วนที่มีความผูกพันที่แข็งแกร่งของตัวอย่างของคุณสามารถติดกับบรรจุ นี่ทําให้เกิดความดันสูงขึ้นและรูปร่างจุดสูงสุดไม่ดี เฟสคงที่ยังสามารถสลายได้เมื่อเวลาผ่านไป โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่ pH สูงหรือต่ำ
การติดตั้งที่ไม่ดี: คอลัมน์ที่เชื่อมต่อไม่ดีอาจทําให้เกิดปัญหา มันสามารถรั่วไหลหรือสร้าง “ ปริมาณที่ตาย” ที่ตัวอย่างอาจติดอยู่นําไปสู่ยอดกว้างหรือแยก
- ปั๊มและฉีด
ชิ้นส่วนเหล่านี้เป็นผู้รับผิดชอบสําหรับการไหลที่คงที่และการแนะนำตัวอย่างที่สะอาด
ซีลปั๊มและวาล์วตรวจสอบ: ซีลปั๊มที่สวมใส่มักจะทําให้เกิดการรั่วไหลและปัญหาความดัน วาล์วตรวจสอบความผิดพลาดนําไปสู่การไหลที่ไม่มั่นคง นี่ทำให้เวลาเก็บรักษาของคุณไม่น่าเชื่อถือ
ปัญหาของเครื่องฉีดและเครื่องตัวอย่างอัตโนมัติ: เครื่องฉีดสกปรกสามารถทำให้จุดยอดแยกหรือหาง ด้วยตัวอย่างอัตโนมัติ เข็มโค้งสามารถทำลายการฉีด มัน’ นอกจากนี้ยังมีความสำคัญในการใช้ตัวทำละลายล้างที่ดีเพื่อป้องกันการขนส่งตัวอย่าง
- เครื่องตรวจจับ
เครื่องตรวจจับ’ ประสิทธิภาพเป็นกุญแจในการได้รับข้อมูลที่มีคุณภาพ
ประสิทธิภาพของหลอดไฟ: ในเครื่องตรวจจับ UV หลอดไฟเก่าจะหมอง นี่เพิ่มเสียงรบกวนมากขึ้น และทำให้เครื่องตรวจจับความไวน้อยลง คุณยังควรตรวจสอบการปรับความยาวคลื่นทุกครั้ง
ปัญหาเซลล์ไหล: ฟองอากาศที่ติดอยู่ในเซลล์ไหล สร้างจุดใหญ่และคมชัดบนเส้นพื้นฐาน ถ้าเซลล์ไหลสกปรก มันสามารถทำให้เส้นฐานลอย
การบำรุงรักษาป้องกันสำหรับการดําเนินการ HPLC ที่น่าเชื่อถือ
การบำรุงรักษาเป็นประจําเป็นวิธีที่ดีที่สุดในการป้องกันปัญหา มันจะช่วยให้เครื่องของคุณมีความยาวนานขึ้น มันยังมั่นใจว่าคุณจะได้รับผลที่คุณสามารถไว้วางใจได้
รายการตรวจสอบการบำรุงรักษาป้องกัน:
ทุกวัน: ตรวจสอบระดับตัวทำละลายทุกวัน ค้นหาการรั่วไหล และดูความดันระบบ นอกจากนี้ยังสำคัญมากที่จะล้างระบบหลังจากใช้บัฟเฟอร์เพื่อป้องกันการสะสมเกลือ
ทุกสัปดาห์: เช็ดด้านนอกของเครื่อง ตรวจสอบโคมไฟตรวจจับ’ ประสิทธิภาพเพื่อดูว่ามัน’ กำลังจะหายไป
ทุกเดือน: วางแผนการเปลี่ยนชิ้นส่วนที่ใช้ได้ เช่น ซีลปั๊มและกรองอินไลน์ ดูท่อเพื่อหาอาการของความเสียหาย
แนะนำ PERSEE: ผู้ผลิตเครื่องมือวิเคราะห์ที่เชื่อถือได้
ในตลาดที่ยาก อุปกรณ์ที่เหมาะสมทําความแตกต่างทั้งหมด เพอร์ส เป็นพันธมิตรที่น่าเชื่อถือที่ให้บริการวิเคราะห์ที่แข็งแกร่ง ด้วยความสนใจที่ชัดเจนในแนวคิดใหม่ PERSEE รวมการผลิตที่ก้าวหน้ากับ R& ทีม D นี้รับประกันทุกเครื่องมือ ให้ประสิทธิภาพและความน่าเชื่อถือสูงสุด.
สายผลิตภัณฑ์ของพวกเขาแสดงความมุ่งมั่นนี้ ตัวอย่างที่ดีคือความหลากหลาย ระบบโครมาโตแกรฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง L600L600 ถูกสร้างขึ้นเพื่อการทำงานในห้องปฏิบัติการทุกวัน มีอินเตอร์เฟซที่ใช้งานง่ายและการออกแบบแบบแบบโมดูลเพื่อให้สามารถเติบโตตามความต้องการของคุณ ฮาร์ดแวร์ที่แข็งแกร่งของมันเหมาะสำหรับการใช้งานหลายอย่าง ตั้งแต่การวิเคราะห์ยาจนถึงการทดสอบความปลอดภัยของอาหาร
บทสรุป
การทำงาน HPLC ที่ดีคือการผสมผสานวิทยาศาสตร์และทักษะทางปฏิบัติ ด้วยการปฏิบัติตามแผนที่เหตุผล คุณสามารถแก้ปัญหาส่วนใหญ่ได้อย่างรวดเร็ว ตรวจสอบขั้นตอนเคลื่อนที่ แล้วคอลัมน์ แล้วปั๊มและเครื่องตรวจจับ แต่ที่สำคัญยิ่งกว่านั้นคือการบำรุงรักษาเป็นประจํา มัน’ วิธีที่ดีที่สุดในการหลีกเลี่ยงการปิดแปลกใจ ความมุ่งมั่นที่เรียบง่ายนี้เป็นปัจจัยที่สําคัญที่สุดสําหรับการได้รับผลที่แม่นยำและซ้ำได้ในระยะยาว
คำถามที่ถามบ่อย (FAQ)
Q1: สาเหตุที่พบมากที่สุดของ peak tailing ใน HPLC คืออะไร?
ตอบ: การติดหายสูงสุดมักจะเกิดขึ้นเนื่องจากปฏิสัมพันธ์ที่ไม่ต้องการระหว่างวัสดุวิเคราะห์ของคุณ (โดยเฉพาะถ้ามันเป็นกรดหรือพื้นฐาน) การใช้คอลัมน์ที่ทันสมัย ที่มีฝาปิด หรือการปรับ pH เฟสเคลื่อนที่มักจะแก้ปัญหานี้ เหตุผลสำคัญอีกอย่างคือการฉีดตัวอย่างมากเกินไป ซึ่งสามารถแก้ไขได้โดยการจ่ายตัวอย่างของคุณ
Q2: ฉันควรดําเนินการบำรุงรักษาระบบ HPLC ของฉันบ่อยแค่ไหน?
ตอบ: นี่ขึ้นอยู่กับว่าคุณใช้มันมากแค่ไหน สำหรับห้องทดลองที่วุ่นวายใด ๆ มัน’ เป็นความคิดที่ดีในการตรวจสอบอย่างรวดเร็วทุกวัน (ระดับตัวทำละลาย, ความดัน) วางแผนการตรวจสอบทุกสัปดาห์ และเปลี่ยนชิ้นส่วนที่สวมใส่ได้ทั่วไป เช่น ซีลปั๊มและกรองทุกเดือน โดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าระบบทำงานอย่างต่อเนื่อง
Q3: เส้นฐานของฉันกําลังลอย แม้ว่าตัวทำละลายของฉันจะถูกลดก๊าซ อะไรอาจเป็นสาเหตุ?
ตอบ: หากคุณแน่ใจว่าเฟสมือถือของคุณถูกลดก๊าซ สิ่งต่อไปที่ต้องตรวจสอบคืออุณหภูมิ เส้นฐานที่เลื่อนไหวมักจะเกิดจากการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิรอบตัวตรวจจับหรือคอลัมน์ ตรวจสอบให้แน่ใจว่าอุณหภูมิเตาอบคอลัมน์มีเสถียรภาพ ความเป็นไปได้อื่น ๆ รวมถึงคอลัมน์เก่าที่เริ่มต้น “ เลือด” เฟสคงที่หรือเซลล์การไหลของเครื่องตรวจจับสกปรก
