Приложения

Цели эксперимента
По экспериментам, изучите основные принципы хроматографического анализа и основную работу инструмента и понимайте процесс анализа данных.
Узнайте о хроматографических количественных методах и сравните преимущества и недостатки различных методов.

ВЭЖХ ВВЕДЕНИЕ
Высокая скорость: ВЭЖХ использует инфузионное оборудование высокого давления, скорость потока значительно увеличивается, и скорость анализа чрезвычайно быстрая, в целом всего несколько минут;
Эффективно: частицы наполнителя очень тонкие и регулярные, покрытие на стационарной фазе однородное, а сопротивление массопереноса невелика, поэтому эффективность колонны очень высока.
Высокая чувствительность: детектор чрезвычайно чувствителен: УФ-10-9G, детектор флуоресценции- 10-11G.

Сравнение ВЭЖХ с GC

Объект и объем анализа: анализ GC ограничен газами и стабильными соединениями с низким содержанием кукол, которые составляют только 20% от общего органического вещества;

Выбор мобильной фазы: GC использует ограниченные дополнительные виды «инертных» газов в качестве мобильной фазы, носите только небольшое влияние на компоненты.

Рабочая температура: GC требует высоких температур;
Поля приложения
Благодаря своей высокой чувствительности, количественной точности и подходящей для анализа не летучих и термически нестабильных компонентов, анализ разделения ВЭЖХ чрезвычайно универсален в промышленных и научных исследованиях, особенно в биологии и медицине.

Структура и принцип ВЭЖХ

Рис. 1 Структура ВЭЖХ

ВЭЖХ состоит из насосной системы, системы впрыска, системы разделения, детектора и системы обработки данных.

Инфузионная система высокого давления
1) Подвижная фазовая бутылка: стеклянная бутылка 1-2 л с растворительным фильтром (сплав Ni), его поры составляют приблизительно 2 мкм, что предотвращает перекачивание частиц.
2) Дегассер: ультразвуковое дегазацию или вакуумное нагревание.

3) Насос высокого давления: требования к инфузионному насосу: хорошее уплотнение, стабильный поток без притока, широкий регулируемый диапазон и коррозионная стойкость.

Система впрыска

Ручной форсунок или авто-самплеер

Рис.2 Принцип инъекции

Система разделения столбцов

Рис.2 Принцип разделения

Рис.3 UVD

Принцип разделения
Хроматографический процесс: В системах с двумя несмешивающимися фазами, подвижной фазой и стационарной фазы, третий компонент (то есть растворенная или адсорбат) является непрерывным альтернативным распределением между двумя фазами.
Из -за различий в свойстве подвижной фазы, стационарной фазы и растворенной смесью компоненты демонстрируют различное хроматографическое поведение во время хроматографического процесса, так что компоненты отделяются друг от друга.

Разрешение

Разрешение элюирования является количественной мерой того, насколько хорошо два пика элюирования могут быть дифференцированы в хроматографическом разделении.

Коррекционный коэффициент
Количественный анализ хроматографии основан на том, что количество компонента пропорционально площади пика:

Коэффициент коррекции веса:

Количественный метод
Внешний стандартный метод
Калибровочная кривая может быть установлена ​​в соответствии с следующими уравнениями:

Применяется к регулярному анализу
Преимущества: легкая работа и расчет
Нехватка: Точность результатов зависит от повторяемости впрыска и стабильности рабочих условий.

Метод внутреннего стандарта

Добавьте определенное количество чистого вещества в выборку в качестве внутреннего стандарта.

Диапазон применения: определить только несколько компонентов образца, и не все пики компонентов могут быть проторены
Преимущества: меньше влияния рабочих условий, значительных презервативных и меньших ограничений, чем метод нормализации, подходящая для анализа трассировки
Нехватка: непригодный для быстрого анализа.

Шприц

Игла шприца GC является острым, а игла шприца LC плоская.

Эксперимент

Экспериментальные условия
1) Внедрить 10 мкл Смешайте стандартные растворы (метиловый парабен, пропиловый парабен и бутиловый парабен) в различное соотношение подвижных фаз метанола: вода = 90:10, 80:20 и 70:30, чтобы проверить время задержки записи и разрешение между различными компонентами, с разрешением, превышающим 1,5 и кратчайшее время удержания в качестве основного мобильного фазы.
Примечание. Каждый раз, когда вы меняете мобильную фазу, вам нужно подождать около 5 минут, чтобы сбалансировать хроматографическую систему (как линии сигнала, так и давления сбалансированы).
2) Введите 10 мкл Смешайте стандартные растворы (метиловый парабен, пропиловый парабен и бутиловый парабен) в различных скоростях потока мобильной фазы 0,8, 1,0 и 1,5 мл {{url_placeholder_0}} и оптимальный анализ инъекции мобильных фазовых коэффициентов, один и тот же принцип выбрал наилучшую скорость потока мобильной фазы.

Качественный анализ
В оптимальных экспериментальных условиях вводят по 10 мкл каждый из метилового парабена, пропилового парабена и бутилового парабена, и регистрируется время удержания каждого пика.

Количественный анализ
Калибровочная кривая
В оптимальных условиях эксперимента 2, 5, 8, 10, 15 и 20 мкл смешанного стандартного образца вводили и проанализировали, а стандартная кривая определяется объемом впрыска и площадью пика.
Требуется, чтобы коэффициент корреляции этой кривой превышал 0,99.

Неизвестный анализ образца
Введите 10 мкл Неизвестный образец для проверки, количественный анализ с помощью калибровочной кривой.

Вопросы
Основываясь на экспериментальных данных, обсудите различия в методах анализа между газовой хроматографией и жидкой хроматографией.
Исследуйте значение приложения анализа ВЭЖХ.
Подходит ли УФ -детектор для обнаружения всего органического соединения?