Высокопродуктивная жидкостная хроматография (HPLC) является ключевым инструментом для ученых. Это позволяет им разделять, идентифицировать и измерять различные части смеси. Метод зависит от того, как молекулы образца взаимодействуют с жидкостью (мобильная фаза) и твердым (стационарная фаза). HPLC известна тем, что дает точные и стабильные результаты. Это делает его решающим во многих областях, от фармацевтики до безопасности пищевых продуктов. Но получение качественных данных ’ t дана. Для этого требуется хорошо обслуживаемая система HPLC, которая работает наилучшим образом.
Это руководство предлагает простой, поэтапный план для поиска и решения общих проблем. Следуя этим советам поможет вам получить лучшие данные и улучшить вашу систему’ с общей производительностью.
Частые проблемы в работе HPLC
Знание признаков проблемы – первый шаг к ее устранению.
Базовый шум и дрейф: ваша базовая линия может показывать случайные пики (шум) или медленный, стабильный наклон (дрейф). Это легко скрывает небольшие вершины. Это также затрудняет получение точных результатов. Обычными причинами являются грязная подвижная фаза, колебания температуры или слабая детекторная лампа.
Сходы времени удержания: соединение может выйти раньше или позже, чем ожидалось. Такое несоответствие затрудняет повторение результатов. Это’ Часто из-за незначительных изменений в мобильной фазе, старой колонки, нестабильного насоса или изменений температуры.
- Плохая форма пика (Tailing, Fronting, Splitting):
- Хвостовые вершины имеют длинный, наклонный конец. Это может произойти по двум основным причинам. Вы можете вводить слишком много образца, или ваши соединения приклеиваются к упаковке колонки.
- Фронтинг: Фронтинговые пики смотрят вперед. Это обычный признак того, что ваш растворитель образца гораздо сильнее, чем ваша мобильная фаза.
- Разделение: Разделенные вершины выглядят как два вершины, слитые в один. Это указывает на проблему. Это может быть частично забитый вход колонны, пустота в упаковке колонны или плохое впрысквание.
- Количества давления и блокировки:
- Устойчивый, медленный рост: это часто указывает на постепенную заборку. Небольшие частицы из вашего образца могут накапливаться на передней части колонки или на фильтре.
- Внезапные скаки давления: резкий прыжок давления обычно означает, что только что произошла большая блокада.
- Падение давления или нестабильность: быстрое падение давления почти всегда указывает на утечку. Если давление просто прыгает вокруг, у вас, вероятно, есть воздушные пузырьки в насосе.
Систематическое устранение неисправностей компонентов HPLC
Чтобы хорошо решить проблему, вам нужен организованный план. Проверьте каждую часть системы по одной.
- Мобильная фаза
Это жизненная кровь вашей системы. Это также очень распространенный источник проблем.
Качество растворителя: всегда начинайте с растворителей высокой чистоты, класса HPLC. Сделайте ваши мобильные фазы свежими. Примерности приводят к дополнительным нежелательным сигналам, таким как базовый шум или пики призраков.
Проблемы с рН и буфером: рН вашей мобильной фазы должен быть стабильным и правильным. Даже небольшие смены могут сильно повлиять на время удержания. Кроме того, убедитесь, что любые буферы полностью растворены и фильтрованы перед использованием.
Дегазирование: крошечные газовые пузырьки могут вызвать большие проблемы. Они приводят к нестабильному давлению и пикам в вашей базовой линии. Обязательно дегазируйте свою мобильную фазу хорошо со встроенным дегазатором, спиркингом гелия или размещением его в ультразвуковой ванне.
- Колонна HPLC
Колонна выполняет всю работу разделения. Его состояние критическое.
Загрязнение и старение: колонны грязны при использовании. Сильные связывающие части вашего образца могут прилепиться к упаковке. Это приводит к повышению давления и плохим формам пиков. Стационарная фаза также может распадаться со временем, особенно при очень высоком или низком рН.
Плохая установка: плохо подключенная колонка может вызвать проблемы. Он может утечь или создать “ мертвые объемы” где образец может застрять, приводя к широким или разделенным пикам.
- Насос и инжектор
Эти части отвечают за стабильный поток и чистое введение образца.
Уплотнители насосов и контрольные клапаны: изношенные уплотнения насосов часто вызывают утечки и проблемы давления. Неисправные контрольные клапаны приводят к нестабильному потоку. Это делает ваше время хранения ненадежным.
Проблемы с инжектором и автопробойщиком: грязный инжектор может сделать пики разделенными или хвостом. С помощью автопробирателей изгибнутая игла может разрушить инъекцию. Это’ с также жизненно важным для использования хорошего растворителя для мытья для предотвращения переноса образца.
- Детектор
Детектор’ Производительность является ключом к получению качественных данных.
Производительность лампы: в УФ-детекторах старая лампа затемняется. Это добавляет больше шума и делает детектор менее чувствительным. Вы также должны проверять калибровку длины волны время от времени.
Проблемы с клетками потока: воздушный пузырь, захваченный в клетке потока, создает большие, резкие шипы на базовой линии. Если клетка потока грязная, она может сделать дрейф базовой линии.
Профилактическое обслуживание для надежной работы HPLC
Регулярное обслуживание – лучший способ предотвратить проблемы. Это помогает вашей машине длиться дольше. Это также гарантирует, что вы получите результаты, которым можете доверять.
Перечень профилактического обслуживания:
Каждый день: проверяйте уровень растворителей ежедневно. Ищите утечки и следите за давлением системы. Также очень важно промыть систему после использования буферов, чтобы предотвратить накопление соли.
Каждую неделю: утерите внешнюю часть машины. Проверьте лампу детектора’ с производительность, чтобы увидеть, если это’ Станет темно.
Каждый месяц: Создайте план замены расходных частей, таких как уплотнения насосов и встроенные фильтры. Посмотрите на трубку на любые признаки повреждения.
Представление PERSEE: надежного производителя аналитических приборов
На сложном рынке правильное оборудование делает всю разницу. Перси является надежным партнером, который предлагает надежные аналитические решения. С четким фокусом на новых идеях, PERSEE сочетает передовое производство с специализированными исследованиями и разработками; Команда D. Это обеспечивает каждый инструмент обеспечивает высшую производительность и надежность.
Их продуктовая линия демонстрирует эту преданность. Хорошим примером является универсальность Система жидкой хроматографии высокой производительности L600. L600 построен для практической, повседневной лабораторной работы. Он имеет простой в использовании интерфейс и модульную конструкцию, так что он может расти с вашими потребностями. Его прочное оборудование хорошо подходит для многих видов применения, от анализа лекарств до тестирования безопасности пищевых продуктов.
Заключение
Хорошая работа HPLC - это сочетание науки и практических навыков. Следуя логическому плану, вы можете решить большинство проблем быстро. Проверьте подвижную фазу, затем колонку, затем насос и детектор. Но еще более важным является регулярное обслуживание. Это’ Лучший способ избежать неожиданного отключения. Эта простая приверженность является самым важным фактором для получения точных и повторимых результатов в долгосрочной перспективе.
Часто задаваемые вопросы (FAQ)
Q1: Что является наиболее распространенной причиной пика хвоста в HPLC?
О: Пик хвоста обычно происходит из-за нежелательных взаимодействий между вашими аналитами (особенно если они кислые или базовые) и кремниевым материалом в колонке. Использование современной колонки с конечной крышкой или регулирование pH подвижной фазы часто решает это. Другой ключевой причиной является введение слишком много образца, который может быть исправлен разбавлением образца.
Q2: Как часто я должен выполнять обслуживание моей системы HPLC?
A: Это действительно зависит от того, сколько вы используете его. Для любой занятой лаборатории, это’ Хорошая идея - ежедневно проводить быстрые проверки (уровни растворителей, давление). Планируйте еженедельные проверки и заменяйте обычные носимые детали, такие как уплотнения насосов и фильтры ежемесячно, особенно если система работает непрерывно.
Q3: Моя базовая линия дрейфует, хотя мои растворители дегазированы. Что может быть причиной?
А: Если вы уверены, что ваша мобильная фаза дегазирована, следующее, что нужно проверить, это температура. Дрифтирующая базовая линия часто вызвана изменениями температуры вокруг детектора или колонны. Убедитесь, что температура колонной печи стабильна. Другие возможности включают старую колонку, которая начинает “ кровотечение” его стационарная фаза или грязная детекторная клетка потока.
