Aplikasi

Tujuan Eksperimen
Dengan eksperimen, pelajari prinsip -prinsip dasar analisis kromatografi dan operasi dasar instrumen, dan pahami proses analisis data.
Pelajari tentang metode kuantitatif kromatografi dan bandingkan kelebihan dan kekurangan metode yang berbeda.

PENDAHULUAN HPLC
Kecepatan tinggi: HPLC menggunakan peralatan infus bertekanan tinggi, laju aliran sangat meningkat, dan kecepatan analisis sangat cepat, hanya beberapa menit secara umum;
Efisien: Partikel pengisi sangat halus dan teratur, lapisan pada fase stasioner seragam, dan resistansi transfer massa kecil, sehingga efisiensi kolom sangat tinggi.
Sensitivitas Tinggi: Detektor sangat sensitif: UV- 10-9G, Detektor Fluoresensi- 10-11G.

Perbandingan HPLC dengan GC

Objek dan ruang lingkup analisis: Analisis GC terbatas pada gas dan senyawa stabil yang mendidih rendah, yang hanya menyumbang 20% ​​dari total bahan organik;

Pilihan fase gerak: GC menggunakan jenis gas "inert" opsional terbatas sebagai fase gerak, hanya membawa, efek kecil pada komponen.

Suhu operasi: GC membutuhkan suhu tinggi;
Bidang aplikasi
Karena sensitivitasnya yang tinggi, akurasi kuantitatif, dan cocok untuk analisis komponen non-volatil dan tidak stabil, analisis pemisahan HPLC sangat fleksibel dalam penelitian industri dan ilmiah, terutama dalam biologi dan kedokteran.

Struktur dan Prinsip HPLC

Gbr. 1 Struktur HPLC

HPLC terdiri dari sistem pompa, sistem injeksi, sistem pemisahan, sistem pemrosesan detektor dan data.

Sistem infus bertekanan tinggi
1) Botol fase gerak: Botol kaca 1-2L dengan filter pelarut (paduan Ni), pori-porinya sekitar 2 μm, mencegah partikulat memompa.
2) Degasser: Degassing ultrasonik atau pemanas vakum degassing.

3) Pompa bertekanan tinggi: Persyaratan untuk pompa infus: penyegelan yang baik, aliran stabil tanpa masuknya, rentang yang dapat disesuaikan lebar, dan resistensi korosi.

Sistem Injeksi

Injektor manual atau sampel otomatis

Gbr.2 Prinsip Injeksi

Sistem Pemisahan Kolom

Gbr.2 Prinsip Pemisahan

Gbr.3 UVD

Prinsip Pemisahan
Proses kromatografi: Dalam sistem dengan dua fase yang tidak dapat dicukur, fase gerak dan fase stasioner, komponen ketiga (yaitu zat terlarut atau adsorbat) adalah distribusi alternatif yang terus menerus antara kedua fase.
Karena perbedaan dalam properti fase gerak, fase diam, dan campuran zat terlarut, komponen menunjukkan perilaku kromatografi yang berbeda selama proses kromatografi, sehingga komponen dipisahkan satu sama lain.

Resolusi

Resolusi elusi adalah ukuran kuantitatif tentang seberapa baik dua puncak elusi dapat dibedakan dalam pemisahan kromatografi.

Faktor koreksi
Analisis kuantitatif kromatografi didasarkan pada bahwa jumlah komponen sebanding dengan area puncak:

Faktor Koreksi Berat:

Metode kuantitatif
Metode Standar Eksternal
Kurva kalibrasi dapat ditetapkan sesuai dengan persamaan berikut:

Diterapkan pada analisis reguler
Keuntungan: Operasi dan Perhitungan Mudah
Kekurangan: Keakuratan hasil tergantung pada pengulangan injeksi dan stabilitas kondisi operasi.

Metode Standar Internal

Tambahkan sejumlah zat murni ke dalam sampel sebagai standar internal.

Rentang Aplikasi: Hanya tentukan beberapa komponen sampel, dan tidak semua puncak komponen dapat dialihkan
Keuntungan: lebih sedikit pengaruh kondisi operasi, jauh preciser, dan lebih sedikit pembatasan daripada metode normalisasi, cocok untuk analisis jejak
Kekurangan: Tidak layak untuk analisis cepat.

Jarum suntik

Jarum jarum suntik GC tajam dan jarum jarum suntik LC datar.

Percobaan

Kondisi eksperimental
1) menyuntikkan solusi standar campuran 10μL (metil paraben, propil paraben, dan butil paraben) dalam fase seluler rasio metanol yang berbeda: air = 90:10, 80:20, dan 70:30 untuk menguji, mencatat waktu retensi dan resolusi antara berbagai komponen, dengan resolusi yang lebih besar dari 1,5 dan waktu retensi terpilih sebagai prinsip yang terpilih dari prinsip yang lebih besar dari prinsip yang lebih besar dari fase yang lebih besar dari 1,5 dan prinsip yang lebih besar dari retensi terpilih, dengan resolusi yang lebih besar dari 1,5 dan prinsip yang lebih besar dari retensi, dengan resolusi yang lebih besar dari 1,5 dan resolusi yang lebih besar dari retensi, dengan resolusi yang lebih besar dari 1,5 dan resolusi terpilih, dengan resolusi yang lebih besar dari 1,5 dan prinsip terpilih, dengan resolusi yang lebih besar dari 1,5 dan resolusi terkini dan.
Catatan: Setiap kali Anda mengubah fase seluler, Anda harus menunggu sekitar 5 menit untuk menyeimbangkan sistem kromatografi (baik saluran sinyal dan tekanan seimbang).
2) menyuntikkan 10 μL solusi standar campuran (methyl paraben, propyl paraben, dan butyl paraben) pada laju aliran fase gerak yang berbeda 0,8, 1.0, dan 1,5 ml {{URL_Placeholder_0}} dan analisis injeksi fase seluler yang optimal, prinsip yang sama memilih laju aliran fase mobile terbaik.

Analisis Kualitatif
Di bawah kondisi eksperimental yang optimal, menyuntikkan 10 μl masing -masing dari paraben metil, paraben propil, dan paraben butil dan waktu retensi setiap puncak dicatat.

Analisis kuantitatif
Kurva kalibrasi
Di bawah kondisi eksperimental yang optimal, 2, 5, 8, 10, 15, dan 20 μl sampel standar campuran disuntikkan dan dianalisis, dan kurva standar ditetapkan dengan volume injeksi dan area puncak.
Diperlukan bahwa koefisien korelasi kurva ini lebih besar dari 0,99.

Analisis sampel yang tidak diketahui
Menyuntikkan 10 μL sampel yang tidak diketahui untuk diuji, analisis kuantitatif dengan kurva kalibrasi.

Pertanyaan
Berdasarkan data eksperimental, diskusikan perbedaan dalam metode analisis antara kromatografi gas dan kromatografi cair.
Jelajahi nilai aplikasi analisis HPLC.
Apakah detektor UV cocok untuk mendeteksi semua senyawa organik?