La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) es una herramienta clave para los científicos. Permite separar, identificar y medir las diferentes partes de una mezcla. La técnica se basa en cómo las moléculas de muestra interactúan con un líquido (la fase móvil) y un sólido (la fase estacionaria). La HPLC es conocida por dar resultados precisos y constantes. Esto lo hace crucial en muchos campos, desde los productos farmacéuticos hasta la seguridad alimentaria. Pero obtener datos de calidad es’ t un dado. Requiere un sistema de HPLC bien mantenido que esté funcionando a su mejor.
Esta guía ofrece un plan simple y paso a paso para encontrar y resolver problemas comunes. Siguiendo estos consejos le ayudará a obtener mejores datos y mejorar su sistema’ El rendimiento general.
Problemas comunes en la operación HPLC
Conocer los signos de un problema es el primer paso para solucionarlo.
Ruido y deriva de línea de base: Su línea de base puede mostrar picos aleatorios (ruido) o una pendiente lenta y constante (deriva). Esto puede ocultar fácilmente picos pequeños. También hace que obtener resultados precisos sea mucho más difícil. Las causas habituales son una fase móvil sucia, oscilaciones de temperatura o una lámpara detectora débil.
Cambios de tiempo de retención: Un compuesto puede eluir antes o después de lo esperado. Esta inconsistencia hace que los resultados sean difíciles de repetir. Es’ a menudo debido a cambios leves en su fase móvil, una columna antigua, una bomba inestable o cambios de temperatura.
- Pobre forma de pico (cola, frontal, división):
- Cola: Los picos de cola tienen un extremo largo y inclinado. Esto puede suceder por dos razones principales. Es posible que esté inyectando demasiada muestra o que sus compuestos se peguen al envase de la columna.
- Fronting: Los picos frontales se ven empujados hacia adelante. Esta es una señal común de que su disolvente de muestra es mucho más fuerte que su fase móvil.
- División: Los picos divididos parecen dos picos fusionados en uno. Esto señala un problema. Podría ser una entrada de columna parcialmente obstruida, un vacío en el envase de la columna o una mala inyección.
- Fluctuaciones de presión y bloqueos:
- Un aumento constante y lento: Esto a menudo apunta a una obstrucción gradual. Las partículas pequeñas de su muestra pueden estar acumulándose en la parte frontal de la columna o en un filtro.
- Picos repentinos de presión: Un salto brusco en la presión generalmente significa que acaba de suceder un gran bloqueo.
- Caídas de presión o inestabilidad: Una caída rápida de presión casi siempre indica una fuga. Si la presión está saltando, es probable que tenga burbujas de aire en la bomba.
Solución sistemática de problemas de componentes HPLC
Para resolver un problema bien, necesitas un plan organizado. Compruebe cada parte del sistema una por una.
- La fase móvil
Esta es la sangre vital de su sistema. También es una fuente muy común de problemas.
Calidad del disolvente: Siempre comience con disolventes de HPLC de alta pureza. Haz que tus fases móviles sean frescas. Las impurezas conducen a señales adicionales no deseadas como ruido de base o picos fantasma.
Problemas de pH y tampón: El pH de su fase móvil debe ser estable y correcto. Incluso pequeños cambios pueden afectar en gran medida los tiempos de retención. Además, asegúrese de que los tampones se disuelvan completamente y se filtren antes de su uso.
Desgasificación: Las pequeñas burbujas de gas pueden causar grandes problemas. Conducen a presión inestable y picos en su línea de base. Asegúrese de desgasificar su fase móvil bien con un desgasificador incorporado, sparging de helio, o colocándolo en un baño de ultrasonidos.
- La columna HPLC
La columna hace todo el trabajo de separación. Su estado es crítico.
Contaminación y envejecimiento: Las columnas se ensucian con el uso. Las partes de unión fuerte de su muestra pueden adherirse al embalaje. Esto provoca una presión más alta y formas de pico pobres. La fase estacionaria también puede descomponerse con el tiempo, especialmente a pH muy alto o bajo.
Instalación incorrecta: Una columna mal conectada puede causar problemas. Puede filtrarse o crear “ volúmenes muertos” donde la muestra puede quedar atascada, lo que conduce a picos anchos o divididos.
- La bomba y el inyector
Estas partes son responsables de un flujo constante e introducción limpia de la muestra.
Sellos de bomba y válvulas de retención: Los sellos de bomba desgastados a menudo causan fugas y problemas de presión. Las válvulas de retención defectuosas conducen a un flujo inestable. Esto hace que sus tiempos de retención no sean fiables.
Problemas del inyector y el automuestreador: Un inyector sucio puede hacer que los picos se dividan o colan. Con los automuestreadores, una aguja doblada puede arruinar la inyección. Es’ También es vital usar un buen disolvente de lavado para prevenir el traslado de la muestra.
- El detector
El detector’ El rendimiento es clave para obtener datos de calidad.
Rendimiento de la lámpara: En los detectores UV, una lámpara antigua se oscurece. Esto agrega más ruido y hace que el detector sea menos sensible. También debe comprobar la calibración de la longitud de onda de vez en cuando.
Problemas de la célula de flujo: Una burbuja de aire atrapada en la célula de flujo crea picos grandes y agudos en la línea de base. Si la célula de flujo está sucia, puede hacer la deriva de la línea de base.
Mantenimiento preventivo para una operación HPLC fiable
El mantenimiento regular es la mejor manera de prevenir problemas. Ayuda a su máquina a durar más tiempo. También garantiza que obtenga resultados en los que pueda confiar.
Lista de control de mantenimiento preventivo:
Todos los días: Compruebe los niveles de disolventes diariamente. Busque fugas y observe la presión del sistema. También es muy importante lavar el sistema después de usar tampones para prevenir la acumulación de sal.
Cada semana: Limpia el exterior de la máquina. Compruebe la lámpara del detector’ rendimiento para ver si’ se pone oscuro.
Cada mes: Haz un plan para cambiar las partes consumibles, como los sellos de la bomba y los filtros en línea. Revise el tubo para detectar signos de daño.
Presentación de PERSEE: un fabricante confiable de instrumentos analíticos
En un mercado difícil, el equipo adecuado hace toda la diferencia. Perseguir es un socio confiable que ofrece soluciones analíticas sólidas. Con un enfoque claro en nuevas ideas, PERSEE combina la fabricación avanzada con una I+D dedicada. Equipo D. Esto garantiza que cada instrumento proporciona el máximo rendimiento y fiabilidad.
Su línea de productos muestra esta dedicación. Un buen ejemplo es el versátil Sistema de cromatografía líquida de alto rendimiento L600El L600 está diseñado para el trabajo práctico y cotidiano de laboratorio. Tiene una interfaz fácil de usar y un diseño modular, para que pueda crecer con sus necesidades. Su hardware resistente es adecuado para muchos usos, desde el análisis de medicamentos hasta las pruebas de seguridad alimentaria.
Conclusión
El buen trabajo de HPLC es una mezcla de ciencia y habilidad práctica. Al seguir un plan lógico, puedes resolver la mayoría de los problemas rápidamente. Compruebe la fase móvil, luego la columna, luego la bomba y el detector. Pero aún más importante es el mantenimiento regular. Es’ es la mejor manera de evitar paradas sorpresas. Este simple compromiso es el factor más importante para obtener resultados precisos y repetibles a largo plazo.
Preguntas más frecuentes (FAQ)
Q1: ¿Cuál es la causa más común de pico de cola en HPLC?
R: El pico de cola generalmente ocurre debido a interacciones no deseadas entre sus analitos (especialmente si son ácidos o básicos) y el material de sílice en la columna. El uso de una columna moderna con tapa de extremo o el ajuste del pH de la fase móvil a menudo resuelve esto. Otra razón clave es inyectar demasiada muestra, que se puede solucionar diluyendo su muestra.
Q2: ¿Con qué frecuencia debo realizar el mantenimiento de mi sistema HPLC?
R: Esto realmente depende de cuánto lo utilice. Para cualquier laboratorio ocupado, es’ Es una buena idea hacer comprobaciones rápidas diariamente (niveles de disolventes, presión). Planificar inspecciones semanales y reemplazar piezas portátiles comunes como sellos de bomba y filtros mensualmente, especialmente si el sistema funciona continuamente.
Q3: Mi línea base está a la deriva a pesar de que mis disolventes están desgasificados. ¿Cuál podría ser la causa?
R: Si está seguro de que su fase móvil está desgasificada, lo siguiente que debe comprobar es la temperatura. Una línea base de deriva a menudo es causada por cambios de temperatura alrededor del detector o la columna. Asegúrese de que la temperatura del horno de columna sea estable. Otras posibilidades incluyen una columna antigua que está empezando a “ sangrado” su fase estacionaria o una célula de flujo detectora de suciedad.
