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Aplicaciones

Método para la determinación del número de diastasa en miel por espectrofotómetro UV-VIS

Principio
Después de colocar la solución de almidón en la solución de muestra de miel, algo de almidón es hidrólisis por diastasa en miel.

Reactivos y material
Excepto aquellos con notificación específica, se utilizan reactivos de grado AR;

Reactivo:
1. Yodo.
2. Yoduro de potasio.
3. Sodium Acetate (CH3COONa ·3H2O).
4. Ácido de acetato helado
5. Cloruro de sodio.
6. almidón soluble.
7. Solución madre de yodo: pese 8.8 g de yodo y 22 g de yoduro de potasio, mezclando con 30 ml de agua, diluido a 1000 ml.
8. Solución de yodo: pese 20 g de yodo de potasio, agregue 5 ml de solución madre de yodo, diluya a 500 ml por agua (esta solución solo se puede usar durante 2 días).
9. Solución tampón de acetato: pH 5,3 (1,59 mol/L). Pesar 87 g de acetato de sodio y diluir en 400 ml de agua. Añadir 10,5 ml de ácido acético helado y diluir hasta 500 ml. Si es necesario, usar acetato de sodio o ácido acético para ajustar el pH a 5,3.
10. Solución de cloruro de sodio (0,5 mol/L): pesar 14,5 g de NaCl, disolver en 500 mL de agua.
11. Solución de almidón: disuelva 2G con almidón soluble en agua de 90 ml.

Equipo:
1. Espectrofotómetro UV-vis.
2. Soporte de celda de temperatura constante

Preparación y conservación de la muestra
Preparación de la muestra:
Revuelva bien la muestra, luego transfiera 0.5 kg a una botella de muestra como muestra de prueba.
Nota: Si el cristal aparece o no, toda la muestra no se puede calentar.

Preserve de muestra:
La muestra se puede conservar a temperatura ambiente.

Procedimiento experimental
Prueba estándar de la solución de almidón
Measure 5.0 mL of starch solution (Reagent 11) and 10.0 mL of water, place in 40℃water bath separately for 15min. Mix the heated starch solution and heated water, then transfer 1mL of mixed solution into 10mL iodine solution (Reagent 8), dilute with certain amount of water and mix well again. Use ultrapure water as blank reference. Measuring the absorbance at 660nm wavelength by UV-Vis spectrophotometer. Record the volume of water needed to produce 0.760±0.2 absorbance. Use this volume as sample dilution coefficient. (If starch source is changed, this standard needs to be remeasured).

Prueba de muestra:
1. Condiciones del espectrofotómetro:
a) longitud de onda: 660 nm
b) Referencia: agua
2. Sample Pretreatment: measure 5g (±0.01g) prepared sample and transfer into a 20mL beaker. Add 15mL water and 2.5mL acetate buffer solution (Reagent 9) in the beaker, then mix with 1.5mL sodium chloride solution (Reagent 10) in a 25mL volumetric flask and dilute to 25mL with water.
3. Measure 5mL starch solution, 10mL sample solution (Sample Testing 2), and 10mL iodine solution, place in 40℃water bath separately for 15min. Transfer the heated starch solution into the heated sample solution and mix well.
4. Después de 5 minutos, transfiera 1.0 ml de solución mixta a una solución de yodo calentada de 10 ml, y diluya con la cantidad registrada de agua (registrada en el paso de solución de almidón estándar) y mezcle bien nuevamente.
5. Si la absorbancia es mayor que 0.235, el cuarto paso debe repetirse hasta que la absorbancia sea inferior a 0.235.
6. During measurement, the mixed solution, iodine solution and water need to be maintained at 40℃water bath. Sample during measurement needs to be put in Constant Temperature Cell Holder.

Cálculo
En un papel de coordenada logarítmica, nombre el eje Y como absorbancia (%) y eje X como tiempo (min).

Where X is the diastase number in solution (mL/(g ·h)), t is the corresponding time (min). The calculated number should round to one decimal place.

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