Nhiệt sắc chất lỏng hiệu suất cao (HPLC) là một công cụ quan trọng cho các nhà khoa học. Nó cho phép chúng tách, xác định và đo các phần khác nhau của hỗn hợp. Kỹ thuật dựa vào cách các phân tử mẫu tương tác với chất lỏng (giai đoạn di động) và chất rắn (giai đoạn tĩnh). HPLC được biết đến để cung cấp kết quả chính xác và ổn định. Điều này làm cho nó rất quan trọng trong nhiều lĩnh vực, từ dược phẩm đến an toàn thực phẩm. Nhưng nhận được dữ liệu chất lượng là’ t được đưa ra. Nó đòi hỏi một hệ thống HPLC được duy trì tốt và hoạt động tốt nhất.
Hướng dẫn này cung cấp một kế hoạch đơn giản, từng bước để tìm và giải quyết các vấn đề phổ biến. Theo các lời khuyên này sẽ giúp bạn có được dữ liệu tốt hơn và cải thiện hệ thống của bạn’ Hiệu suất tổng thể.
Các vấn đề phổ biến trong hoạt động HPLC
Biết các dấu hiệu của một vấn đề là bước đầu tiên để khắc phục nó.
Tiếng ồn và trôi: Tiếng cơ sở của bạn có thể hiển thị các đỉnh ngẫu nhiên (tiếng ồn) hoặc một dốc chậm, ổn định (trôi). Điều này có thể dễ dàng che giấu các đỉnh nhỏ. Nó cũng làm cho việc đạt được kết quả chính xác khó khăn hơn nhiều. Nguyên nhân thông thường là giai đoạn di động bẩn, biến động nhiệt độ hoặc đèn dò yếu.
Thay đổi thời gian lưu trữ: Một hợp chất có thể thoát sớm hoặc muộn hơn dự kiến. Sự không nhất quán này làm cho kết quả khó lặp lại. Nó’ thường do những thay đổi nhẹ trong giai đoạn di động của bạn, một cột cũ, một máy bơm không ổn định hoặc thay đổi nhiệt độ.
- Hình dạng đỉnh cao kém (đuôi, phía trước, tách):
- Tailing: Tailing đỉnh có một đầu dài, dốc. Điều này có thể xảy ra vì hai lý do chính. Bạn có thể tiêm quá nhiều mẫu, hoặc các hợp chất của bạn đang dính vào đóng gói cột.
- Fronting: Các đỉnh phía trước nhìn đẩy về phía trước. Đây là một dấu hiệu phổ biến cho thấy dung môi mẫu của bạn mạnh hơn nhiều so với giai đoạn di động của bạn.
- Chia: Các đỉnh chia trông giống như hai đỉnh hợp nhất thành một. Điều này cho thấy một vấn đề. Nó có thể là một đầu vào cột tắc nghẽn một phần, một khoảng trống trong đóng gói cột hoặc tiêm xấu.
- Biến động áp suất và tắc nghẽn:
- Sự tăng trưởng ổn định, chậm: Điều này thường chỉ ra sự tắc nghẽn dần dần. Các hạt nhỏ từ mẫu của bạn có thể tích tụ ở phía trước của cột hoặc trên bộ lọc.
- Áp suất đột ngột: Một nhảy mạnh trong áp suất thường có nghĩa là một sự tắc nghẽn lớn vừa xảy ra.
- Giảm áp suất hoặc không ổn định: Giảm áp suất nhanh hầu như luôn tín hiệu rò rỉ. Nếu áp suất chỉ nhảy xung quanh, bạn có thể có bong bóng không khí trong máy bơm.
Giải quyết sự cố có hệ thống của các thành phần HPLC
Để giải quyết một vấn đề tốt, bạn cần một kế hoạch có tổ chức. Kiểm tra từng phần của hệ thống từng phần.
- Giai đoạn Mobile
Đây là máu sống của hệ thống của bạn. Nó cũng là một nguồn rắc rối rất phổ biến.
Chất lượng dung môi: Luôn bắt đầu với dung môi tinh khiết cao, lớp HPLC. Làm cho các giai đoạn di động của bạn tươi mới. Các tạp chất dẫn đến các tín hiệu không mong muốn như tiếng ồn cơ bản hoặc đỉnh ma.
Vấn đề pH và bộ đệm: pH pha di động của bạn cần ổn định và chính xác. Ngay cả những thay đổi nhỏ cũng có thể ảnh hưởng rất nhiều đến thời gian lưu trữ. Ngoài ra, hãy chắc chắn rằng bất kỳ bộ đệm nào được hòa tan hoàn toàn và lọc trước khi sử dụng.
Degassing: bong bóng khí nhỏ có thể gây ra các vấn đề lớn. Chúng dẫn đến áp suất không ổn định và đỉnh cao trong dòng cơ sở của bạn. Hãy chắc chắn để degasser pha di động của bạn tốt với một degasser tích hợp, heli sparging, hoặc bằng cách đặt nó trong một phòng tắm siêu âm.
- Cột HPLC
Cột làm tất cả công việc tách. Điều kiện của nó rất quan trọng.
Ô nhiễm và lão hóa: Các cột bị bẩn khi sử dụng. Các bộ phận ràng buộc mạnh mẽ của mẫu của bạn có thể dính vào đóng gói. Điều này gây áp suất cao hơn và hình dạng đỉnh kém. Giai đoạn tĩnh cũng có thể phá vỡ theo thời gian, đặc biệt là ở pH rất cao hoặc thấp.
Cài đặt xấu: Một cột kết nối kém có thể gây ra vấn đề. Nó có thể rò rỉ hoặc tạo “ khối lượng chết” nơi mẫu có thể bị mắc kẹt, dẫn đến đỉnh rộng hoặc tách.
- Bơm và Injector
Những bộ phận này chịu trách nhiệm cho một dòng chảy ổn định và giới thiệu mẫu sạch sẽ.
Niêm phong bơm và van kiểm tra: Niêm phong bơm bị mòn thường gây rò rỉ và vấn đề áp suất. Van kiểm tra bị lỗi dẫn đến một dòng chảy không ổn định. Điều này làm cho thời gian lưu trữ của bạn không đáng tin cậy.
Vấn đề máy tiêm và máy tự động mẫu: Một máy tiêm bẩn có thể làm cho đỉnh tách hoặc đuôi. Với mẫu tự động, một kim uốn cong có thể làm hỏng tiêm. Nó’ s cũng rất quan trọng để sử dụng một dung môi rửa tốt để ngăn chặn mẫu chuyển.
- Máy dò
Máy dò’ Hiệu suất là chìa khóa để có được dữ liệu chất lượng.
Hiệu suất đèn: Trong máy dò UV, một chiếc đèn cũ bị mờ. Điều này thêm tiếng ồn và làm cho máy dò ít nhạy cảm hơn. Bạn cũng nên kiểm tra hiệu chuẩn bước sóng thường xuyên.
Vấn đề tế bào dòng chảy: Một bong bóng không khí bị mắc kẹt trong tế bào dòng chảy tạo ra các đỉnh lớn, sắc nét trên đường cơ sở. Nếu tế bào dòng chảy bẩn, nó có thể làm cho đường trôi trôi cơ bản.
Bảo trì phòng ngừa cho hoạt động HPLC đáng tin cậy
Bảo trì thường xuyên là cách tốt nhất để ngăn chặn các vấn đề. Nó giúp máy của bạn kéo dài lâu hơn. Nó cũng đảm bảo bạn có được kết quả mà bạn có thể tin tưởng.
Danh sách kiểm tra bảo trì phòng ngừa:
Mỗi ngày: Kiểm tra mức dung môi hàng ngày. Tìm rò rỉ và xem áp lực hệ thống. Nó cũng rất quan trọng để rửa hệ thống sau khi sử dụng bộ đệm để ngăn chặn sự tích tụ muối.
Mỗi tuần: lau xuống bên ngoài của máy. Kiểm tra đèn dò’ Hiệu suất để xem nó’ S đang dim.
Mỗi tháng: Lập kế hoạch thay đổi các bộ phận tiêu thụ, chẳng hạn như niêm phong bơm và bộ lọc nội tuyến. Nhìn qua ống cho bất kỳ dấu hiệu của thiệt hại.
Giới thiệu PERSEE: Một nhà sản xuất đáng tin cậy của các dụng cụ phân tích
Trong một thị trường khó khăn, thiết bị phù hợp tạo ra tất cả sự khác biệt. PERSEE là một đối tác đáng tin cậy cung cấp các giải pháp phân tích mạnh mẽ. Với sự tập trung rõ ràng vào các ý tưởng mới, PERSEE kết hợp sản xuất tiên tiến với R & D chuyên dụng; Đội D. Điều này đảm bảo mọi công cụ cung cấp hiệu suất và độ tin cậy hàng đầu.
Dòng sản phẩm của họ thể hiện sự cống hiến này. Một ví dụ tuyệt vời là versatile Hệ thống nhiễm sắc chất lỏng hiệu suất cao L600. L600 được xây dựng cho công việc phòng thí nghiệm thực tế hàng ngày. Nó có giao diện dễ sử dụng và thiết kế mô-đun, vì vậy nó có thể phát triển theo nhu cầu của bạn. Phần cứng cứng của nó phù hợp với nhiều ứng dụng, từ phân tích thuốc đến thử nghiệm an toàn thực phẩm.
Phần kết luận
Công việc HPLC tốt là sự pha trộn của khoa học và kỹ năng thực tế. Bằng cách làm theo một kế hoạch hợp lý, bạn có thể giải quyết hầu hết các vấn đề nhanh chóng. Kiểm tra giai đoạn di động, sau đó là cột, sau đó là máy bơm và máy dò. Nhưng quan trọng hơn là bảo trì thường xuyên. Nó’ Cách tốt nhất để tránh đóng cửa bất ngờ. Sự cam kết đơn giản này là yếu tố quan trọng nhất để có được kết quả chính xác và lặp lại trong thời gian dài.
Câu hỏi thường gặp (FAQs)
Q1: Nguyên nhân phổ biến nhất của đuôi đỉnh trong HPLC là gì?
Trả lời: Đoài đỉnh thường xảy ra do các tương tác không mong muốn giữa chất phân tích của bạn (đặc biệt là nếu chúng là axit hoặc cơ bản) và vật liệu silica trong cột. Sử dụng một cột hiện đại, có nắp cuối hoặc điều chỉnh pH pha di động thường giải quyết điều này. Một lý do chính khác là tiêm quá nhiều mẫu, có thể được sửa chữa bằng cách pha loãng mẫu của bạn.
Q2: Tôi nên thực hiện bảo trì thường xuyên trên hệ thống HPLC của tôi?
A: Điều này thực sự phụ thuộc vào bạn sử dụng nó bao nhiêu. Đối với bất kỳ phòng thí nghiệm bận rộn nào, nó’ Một ý tưởng tốt là kiểm tra nhanh mỗi ngày (mức dung môi, áp suất). Kế hoạch kiểm tra hàng tuần và thay thế các bộ phận có thể mặc phổ biến như niêm phong bơm và bộ lọc hàng tháng, đặc biệt là nếu hệ thống chạy liên tục.
Q3: Điểm cơ bản của tôi đang trôi trôi mặc dù dung môi của tôi được khử khí. Nguyên nhân có thể là gì?
A: Nếu bạn chắc chắn rằng giai đoạn di động của bạn đã được khử khí, điều tiếp theo cần kiểm tra là nhiệt độ. Một dòng cơ sở trôi nổi thường được gây ra bởi sự thay đổi nhiệt độ xung quanh máy dò hoặc cột. Hãy đảm bảo nhiệt độ lò cột ổn định. Các khả năng khác bao gồm một cột cũ bắt đầu “ chảy máu” giai đoạn tĩnh của nó hoặc một tế bào dòng chảy dò bẩn.
