Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi (HPLC), bilim adamları için önemli bir araçtır. Karışımın farklı parçalarını ayırmalarına, tanımlamalarına ve ölçmelerine izin verir. Teknik, örnek moleküllerinin bir sıvı (mobil faz) ve katı (sabit faz) ile nasıl etkileşime girdiğine dayanır. HPLC, kesin ve istikrarlı sonuçlar vermekle bilinir. Bu, ilaçlardan gıda güvenliğine kadar birçok alanda önemli hale getiriyor. Ama kaliteli veri almak’ t verilmiştir. En iyi şekilde çalışan iyi bakılmış bir HPLC sistemi gerektirir.
Bu kılavuz ortak sorunları bulmak ve çözmek için basit, adım adım bir plan sunar. Bu ipuçları takip etmek daha iyi veri almanıza ve sisteminizi geliştirmenize yardımcı olacaktır’ Genel performans.
HPLC Operasyonunda Yaygın Sorunlar
Bir sorunun belirtilerini bilmek, onu düzeltmenin ilk adımıdır.
Baz çizgi Gürültü ve Sürücülük: Baz çizginiz rastgele zirveler (gürültü) veya yavaş, sabit bir eğim (sürüklenme) gösterebilir. Bu, küçük tepeleri kolayca gizleyebilir. Ayrıca doğru sonuçlar elde etmeyi çok daha zorlaştırır. Olağanüstü nedenler kirli bir mobil faz, sıcaklık salıntıları veya zayıf bir detektör lambasıdır.
Retention Time Shifts: Bir bileşik beklenenden daha erken veya daha geç ortaya çıkabilir. Bu uyumsuzluk sonuçların tekrarlanmasını zorlaştırır. Bu’ Genellikle mobil fazanızdaki hafif değişiklikler, eski bir sütun, istikrarsız bir pompa veya sıcaklık değişiklikleri nedeniyle.
- Kötü zirve şekli (Kuyruk, Ön, Bölünme):
- Kuyruk: Kuyruk zirveleri uzun, eğimli bir ucuna sahiptir. Bu iki ana nedenden dolayı olabilir. Çok fazla örnek enjekte ediyor olabilirsiniz veya bileşikleriniz sütun ambalajına yapışıyor olabilir.
- Ön: Ön zirveleri ileriye itmiş görünüyor. Bu, örnek çözücünüzün mobil fazanızdan çok daha güçlü olduğunu gösteren yaygın bir işarettir.
- Bölünme: Bölünmiş zirveler birbirine birleşmiş iki zirve gibi görünüyor. Bu bir sorun işareti. Kısmen tıkanmış bir sütun girişi, sütun ambalajındaki boşluk veya kötü bir enjeksiyon olabilir.
- Basınç dalgalanmaları ve engellemeleri:
- Sabit, Yavaş Yükseleme: Bu genellikle yavaş yavaş tıkanmaya işaret eder. Örneğinizden küçük parçacıklar sütunun önünde veya bir filtrede oluşabilir.
- Ani Basınç Spikes: Basınçta keskin bir atlama genellikle büyük bir tıkanma oldu anlamına gelir.
- Basınç Düşüşümleri veya istikrarsızlık: Hızlı bir basınç düşüşü neredeyse her zaman bir sızıntı işaret eder. Eğer basınç sadece sıçrayırsa, pompada muhtemelen hava baloncuklarınız var.
HPLC Bileşenlerinin Sistematik Sorun Çözümü
Bir sorunu iyi çözmek için, organize bir plana ihtiyacınız var. Sistemin her parçasını tek tek kontrol edin.
- Mobil Aşaması
Bu sisteminizin canı kanıdır. Ayrıca çok yaygın bir sorun kaynağıdır.
Çözücü Kalitesi: Her zaman yüksek saflık, HPLC sınıfı çözücülerle başlayın. Mobil aşamalarınızı taze yapın. Kirlilikler, temel gürültü veya hayalet zirveleri gibi ekstra, istenmeyen sinyallere yol açar.
pH ve Tampon Sorunları: Mobil faz pH'nuzun istikrarlı ve doğru olması gerekir. Küçük değişimler bile tutma sürelerini büyük ölçüde etkileyebilir. Ayrıca, herhangi bir tamponun kullanımdan önce tamamen çözüldüğünden ve filtrelendiğinden emin olun.
Gazsızlama: Küçük gaz baloncukları büyük sorunlara neden olabilir. Temel çizginizde istikrarsız basınç ve zirvelere yol açarlar. Mobil fazanızı yerleşik bir gazlandırma, helyum parçalaması veya ultrasonik banyoya koyarak iyi gazlandırdığınızdan emin olun.
- HPLC Sütunu
Sütun tüm ayrım işlerini yapar. Durumu kritiktir.
Kirlilik ve Yaşlanma: Sütunlar kullanım ile kirlenir. Örneğinizin güçlü bağlayıcı parçaları ambalaja yapışabilir. Bu, daha yüksek basınç ve kötü zirve şekillerine neden olur. Sabit faz da zaman içinde, özellikle çok yüksek veya düşük pH'da parçalanabilir.
Kötü Kurulum: Kötü bağlantılı bir sütun sorunlara neden olabilir. Sızdırabilir veya “ Ölü hacimler” numunenin sıkışıp kalabileceği, geniş veya bölünmüş zirvelere yol açabileceği yer.
- Pompa ve Enjektör
Bu parçalar istikrarlı bir akış ve temiz örnek girişinden sorumludur.
Pompa Mühürleri ve Kontrol Vanaları: Aşınmış pompa mühürleri genellikle sızıntılara ve basınç sorunlarına neden olur. Hatalı kontrol valfleri istikrarsız bir akışa neden olur. Bu, saklama sürelerinizi güvenilmez hale getirir.
Enjektör ve Otomatik Örnekleme Sorunları: Kirli bir enjektör zirveleri bölünebilir veya kuyruk yapabilir. Otomatik örnekleyicilerle, bükülmüş bir iğne enjeksiyonu mahvedebilir. Bu’ örnek taşımasını önlemek için iyi bir yıkama çözücüsü kullanmak da hayati önem taşır.
- Dedektör
Dedektör’ Kaliteli veri elde etmenin anahtarıdır.
Lamba Performansı: UV dedektörlerinde eski bir lamba yoğunlaşır. Bu daha fazla gürültü ekler ve dedektörü daha az hassas hale getirir. Ayrıca dalga boyu kalibrasyonunu sık sık kontrol etmelisiniz.
Akış Hücresi Sorunları: Akış hücresine sıkışmış bir hava baloncuğu, temel çizgide büyük, keskin zirveler oluşturur. Akış hücresi kirli ise, temel çizgi sürüklenmesini yapabilir.
Güvenilir HPLC Operasyonu için Önleyici Bakım
Düzenli bakım sorunları önlemenin en iyi yoludur. Makinenizin daha uzun sürmesine yardımcı olur. Ayrıca güvenebileceğiniz sonuçlar elde etmenizi sağlar.
Önleyici Bakım Kontrol Listesi:
Her Gün: Çözücü seviyelerini her gün kontrol edin. Sızdırmaları arayın ve sistem basıncını izleyin. Tuz birikimini önlemek için tamponlar kullandıktan sonra sistemi yıkamak da çok önemlidir.
Her hafta: Makinenin dışını silin. Dedektör lambasını kontrol edin’ s performansı bu’ Gömülüyor.
Her Ay: Pompa mühürleri ve çevrimiçi filtreler gibi tüketilebilir parçaları değiştirmek için bir plan yapın. Boruya herhangi bir hasar belirtisi için bakın.
PERSEE Tanıtımı: Analitik Aletlerin Güvenilir Bir Üreticisi
Zor bir pazarda, doğru ekipman tüm farkı yaratır. Pansiyon Güçlü analitik çözümler sunan güvenilir bir ortaktır. Yeni fikirlere açık bir odakla PERSEE, gelişmiş üretimi özel bir Ar-Ge ile birleştirir; D takımı. Bu her aleti sağlar En iyi performans ve güvenilirlik sağlar.
Ürün hattı bu bağlılığı gösteriyor. İyi bir örnek çok yönlüdür L600 Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi SistemiL600 pratik, günlük laboratuvar çalışmaları için inşa edilmiştir. Kullanımı kolay bir arayüze ve modüler bir tasarıma sahiptir, böylece ihtiyaçlarınıza göre büyüyebilir. Sert donanımı, ilaç analizinden gıda güvenliği testlerine kadar birçok kullanım için uygundur.
Çözüm
İyi HPLC çalışması bilim ve pratik becerilerin bir karışımıdır. Mantıksal bir planı takip ederek, çoğu sorunu hızlı bir şekilde çözebilirsiniz. Mobil fazı, sonra sütun, sonra pompa ve dedektörü kontrol edin. Daha da önemlisi düzenli bakım. Bu’ Sürpriz kapatmalardan kaçınmanın en iyi yolu. Bu basit taahhüt, uzun vadede doğru ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için en önemli faktördür.
Sıkça Sorulan Sorular (SSS)
S1: HPLC'de zirve kuyruğunun en yaygın nedeni nedir?
A: En yüksek kuyruk genellikle analitleriniz (özellikle asidik veya bazik ise) ve sütundaki silika malzemesi arasındaki istenmeyen etkileşimler nedeniyle oluşur. Modern, uç kapaklı bir sütun kullanmak veya mobil faz pH'sını ayarlamak genellikle bunu çözer. Bir başka önemli neden, örneğinizi seyretleyerek düzeltilebilecek çok fazla örnek enjekte etmektir.
S2: HPLC sistemimi ne sıklıkla bakım yapmalıyım?
C: Bu gerçekten ne kadar kullandığınıza bağlıdır. Herhangi bir meşgul laboratuvar için ’ Günlük hızlı kontroller yapmak iyi bir fikirdir (çözücü seviyeleri, basınç). Haftalık muayeneleri planlayın ve pompa mühürleri ve filtreleri gibi yaygın giyilebilir parçaları her ay değiştirin, özellikle de sistem sürekli çalışırsa.
S3: Çözücülerim gazsızdırılmış olsa da temel çizgim sürükleniyor. Neden olabilir?
C: Mobil fazanızın gazdan boşaltıldığından eminseniz, kontrol edilecek bir sonraki şey sıcaklıktır. Sürüyen bir baz çizgi genellikle detektör veya sütun etrafındaki sıcaklık değişikliklerinden kaynaklanır. Sütun fırınının sıcaklığının istikrarlı olduğundan emin olun. Diğer olasılıklar arasında “'ye başlayan eski bir sütun var; kanama” sabit fazı veya kirli bir detektör akış hücresi.
