โครมาโตแกรฟียกเว้นขนาด (SEC) หรือที่รู้จักกันในชื่อ โครมาโตแกรฟีการซึมซึมเจล (GPC) เป็นเทคนิคการวิเคราะห์ที่มีประสิทธิภาพที่ใช้ในการแยกโมเล มันมีบทบาทสําคัญในการวิเคราะห์โพลิเมอร์ โปรตีน และโมเลกุลอื่น ๆ ในการใช้งานทางวิทยาศาสตร์และอุตสาหกรรมต่างๆ การเข้าใจว่าโมเลกุลใดที่ออกมาเป็นครั้งแรกในโครมาโตกราฟย์ยกเว้นขนาดต้องดำน้ำอย่างลึกซึ้งในหลักการของการแยกโดยใช้รูขุมขุมขุมขุมและพฤติกรรมของโมเลก
หลักการของการยกเว้นขนาด Chromatography
โครมาโตโกรฟายการยกเว้นขนาดทํางานตามหลักการที่ว่าโมเลกุลถูกแยกตามปริมาณไฮโดรไดนามิกของพวกเขา ไม่ใช่น้ำหนักโมเลกุลเท่านั้น กระบวนการขึ้นอยู่กับโมเลกุลขนาดที่แตกต่างกันสามารถเจาะรูขุมขุมของวัสดุเฟสคงที่ได้อย่างดีแค่ไหน
บทบาทของขนาดโมเลกุลในการแยก
ใน SEC ขนาดโมเลกุลกําหนดระดับที่โมเลกุลสามารถเข้าถึงโครงสร้างรูพรุนของวัสดุบรรจุคอลัมน์ได้ โมเลกุลที่ใหญ่กว่าจะไม่เข้าไปในรูขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมข
กลไกการแยกส่วนตามรูขุม
กลไกการแยกเกี่ยวข้องกับเฟสคงที่มีรูพรุน - โดยทั่วไปทําจากโพลิเมอร์ที่เชื่อมโยงข้ามหรือเจลซิลิกา - ผ่านที่สารลดน้ำนำตัวอย่าง โครมาโตกราฟย์ยกเว้นขนาดเป็นเทคนิคการระบุลักษณะที่สําคัญที่สุดสําหรับโมเลกุลใหญ่ เมื่อโมเลกุลผ่านคอลัมน์ ความสามารถในการเข้าไปในรูขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุม
ลักษณะเฟสคงที่และผลกระทบของพวกเขา
ลักษณะทางกายภาพของช่วงคงที่ เช่น การกระจายขนาดรูขุมขุมขุมและเคมีพื้นผิว มีอิทธิพลต่อประสิทธิภาพการแยกอย่างมาก การเพิ่มคอลัมน์ (s) ที่มีความกว้างของรูขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุ การปรับเหล่านี้ช่วยเพิ่มความละเอียดสําหรับช่วงน้ำหนักโมเลกุลเฉพาะ
ปัจจัยที่ส่งผลต่อคำสั่ง Elution
ปัจจัยหลายปัจจัยกําหนดส่วนประกอบใดออกเป็นครั้งแรกในการใช้โครมาโตกราฟยกเว้นขนาด
อิทธิพลของน้ำหนักโมเลกุลเกี่ยวกับปริมาณการละลาย
ปริมาณการ elution เกี่ยวข้องกับขนาดโมเลกุล: โมเลกุลที่ใหญ่กว่า elute ก่อนหน้านี้เพราะพวกเขาเป็น “ ยกเว้น” จากการเข้าสู่รูขุมขุมขุมหลายหรือใด ๆ ความละเอียดที่ต่ำกว่าในภูมิภาคมวลโมลาร์ต่ำส่งผลให้เกิดจุดสูงสุดเดียวแทนที่จะเป็นจุดสูงสุดหลายจุดสําหรับแต
รูปร่างและการสอดคล้องกับโมเลกุล
รูปร่างโมเลกุลก็มีบทบาทด้วย โปรตีนโลกอาจมีพฤติกรรมแตกต่างจากโพลิเมอร์ที่ยาวนาน เนื่องจากความแตกต่างในวิธีการปฏิสัมพันธ์กับโครงสร้างรูขุมขุม แม้ว่าสองสายพันธุ์จะมีน้ำหนักโมเลกุลที่คล้ายกัน การรูปแบบของพวกเขาอาจส่งผลให้เกิดพฤติกรรมการรักษาที่แตกต่างกัน
การปฏิสัมพันธ์กับ Stationary Phase Matrix
แม้ว่า SEC ถูกออกแบบมาเพื่อลดการปฏิสัมพันธ์ระหว่างวิเคราะห์และขั้นตอนคงที่ แต่ปฏิสัมพันธ์ที่อ่อนแออาจเกิดขึ้นขึ้นอยู่กั การปฏิสัมพันธ์เหล่านี้สามารถเปลี่ยนลำดับการ elution เล็กน้อย แต่โดยทั่วไปจะลดลงโดยการเลือกตัวทำละลายและวัสดุที่เหมาะสม
พฤติกรรมการล้างของสายพันธุ์โมเลกุลที่แตกต่างกัน
เพื่อเข้าใจได้ดีกว่าประเภทของสารประกอบ elute ก่อนหรือสุดท้าย, it’ มีประโยชน์ในการตรวจสอบวิธีการที่ขนาดที่แตกต่างกันพฤติกรรมภายในระบบ SEC
โมเลกุลขนาดใหญ่และการเข้าถึงรูขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุม
โมเลกุลขนาดใหญ่ไม่สามารถเจาะรูขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมข ดังนั้น พวกเขาถูกยกเว้นจากปริมาณเฟสคงที่ส่วนใหญ่ และเดินทางผ่านช่องว่างระหว่างอนุภาค
โมเลกุลขนาดกลางและการเจาะบางส่วน
โมเลกุลขนาดกลางสามารถเข้าไปในรูขุมขุมขุมขุมบาง แต่ไม่ใช่ทั้งหมด การรวมส่วนนี้ส่งผลให้เกิดเวลาการเก็บรักษาปานกลาง เนื่องจากพวกเขาสัมผัสกับทั้งเส้นทางการไหลโดยตรงและความล่าช้าภายในเครือข่ายรูขุมขุม
โมเลกุลขนาดเล็กและการเข้าถึงรูขุมขุมขุมเต็ม
โมเลกุลขนาดเล็กสามารถเข้าถึงเกือบทุกปริมาณรูขุมขุมขุมที่มีอยู่ภายในระยะคงที่ เพราะพวกเขาใช้เวลามากขึ้นในการแพร่กระจายผ่านช่องทางภายในเหล่านี้ พวกเขาแสดงเวลาเก็บรักษาที่ยาวนาน
การออกแบบคอลัมน์และผลกระทบต่อการแยก
พารามิเตอร์การออกแบบของคอลัมน์ SEC มีอิทธิพลมากต่อการทํางานและความสามารถในการแก้ไขของมันสำหรับการแยกโมเลกุลขนาดใหญ่ตามขนาด
ความสำคัญของการกระจายขนาดรูขุมขุม
คอลัมน์มักจะถูกเลือกตามขนาดรูขุมขุมขุมเฉลี่ย ที่ปรับแต่งตามช่วงน้ำหนักโมเลกุลเฉพาะ การเพิ่มคอลัมน์ที่มีความกว้างของรูขุมขุมขุมขุมใหญ่ / ความรูขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุ
ขนาดคอลัมน์และการพิจารณาอัตราการไหล
คอลัมน์ที่ยาวนานกว่ามักจะให้ความละเอียดที่ดีกว่าเนื่องจากเวลาปฏิสัมพันธ์ที่เพิ่มขึ้น แต่ยังต้องการระยะเวลาการวิ อัตราการไหลต้องได้รับการปรับปรุง: เร็วเกินไปอาจลดความละเอียด ช้าเกินไปอาจทําให้ความขยายของวงที่เกี่ยวข้องกับการกระจาย
การปรับเทียบโดยใช้เครื่องหมายโมเลกุลมาตรฐาน
การประมาณน้ำหนักโมเลกุลที่แม่นยำต้องการการปรับเทียบโดยใช้มาตรฐานที่มีขนาดที่รู้จัก การใช้ค็อกเทลการปรับเทียบแบบผสมก่อนหน้า (ReadyCal) ช่วยให้การปรับเทียบได้เร็วขึ้นในขณะที่รักษาความแม่นยำในประเภทตัวอย่างที่หลากหลาย
การใช้งานทั่วไปในเคมีวิเคราะห์
SEC ได้กลายเป็นสิ่งที่จําเป็นในหลายโดเมนสำหรับลักษณะคุณสมบัติโมเลกุลขนาดใหญ่ด้วยความแม่นยำ
การทำความสะอาดโปรตีนและการวิเคราะห์การรวม
ในชีวเคมี SEC ใช้กันอย่างแพร่หลายสําหรับการทำความสะอาดโปรตีนอีกจากโครงสร้างสี่หรือการประเมินสถานะการรวม - สําคัญสําหรับการพัฒนาแอนติบอดีการรักษา
ลักษณะโพลีเมอร์ในวิทยาศาสตร์วัสดุ
โพลิเมอร์ โมเลกุลใหญ่ในธรรมชาติ และโพลิเมอร์ชีวภาพ เช่น โปรตีนและแอนติบอดี้ มีอยู่ในชีวิตประจำวันของเรา SEC ช่วยให้การวิเคราะห์อย่างละเอียด เช่น การกระจายมวลโมลาร์, การชี้แจงสถาปัตยกรรม, การตรวจจับการลอยตัวขององค์ประกอบ, หรือการศึกษาการสลายตัวในระหว่
การใช้ในการควบคุมคุณภาพทางชีวภาพ
SEC สนับสนุนโปรโตคอลควบคุมคุณภาพที่เข้มงวดโดยการระบุส่วนรวมหรือชิ้นส่วนที่อาจทําให้เกิดความเสียหายต่อความปลอดภัยหรือประสิทธิภาพของยา - ขั้นตอน
แนะนำ PERSEE เป็นผู้ผลิตที่เชื่อถือได้
ด้วยความต้องการที่เพิ่มขึ้นสําหรับเครื่องมือวิเคราะห์ที่แม่นยำสูงทั่วโลก PERSEE ได้ปรากฏขึ้นเป็นคู่ค้าที่น่าเชื่อถือสําหรับห้องปฏิ
ภาพรวมของ PERSEE’ ความเชี่ยวชาญด้านเครื่องมือวิเคราะห์
เพอร์ส ให้บริการโซลูชั่นที่ครอบคลุมที่ปรับแต่งเพื่อตอบสนองความต้องการที่เปลี่ยนแปลงในสถาบันวิจัยและอุตสาหกรรมเช่นเดียวกัน
เครื่องมือที่กว้างขวางรวมถึงโซลูชั่น Chromatography
พอร์ตโฟลิโอของพวกเขารวมถึงขั้นสูง ระบบ chromatographic ออกแบบมาสําหรับทั้งการวิเคราะห์ประจําและการใช้งานวิจัยที่ทันสมัยที่เกี่ยวข้องกับวิธีการของ SEC
การใช้งานทั่วสาขาวิทยาศาสตร์ อุตสาหกรรม และการศึกษา
เครื่องมือ PERSEE ให้บริการกับภาคที่หลากหลาย รวมถึงยา วิทยาศาสตร์สิ่งแวดล้อม ปิโตรเคมี วิทยาศาสตร์ การทดสอบความปลอดภัยอาหาร และอื่น ๆ แสดงความหลากหลายในทุกวิชา
ความมุ่งมั่นในการนวัตกรรมและการสนับสนุนโลก
การสนับสนุนจากความพยายามนวัตกรรมอย่างต่อเนื่องและโครงสร้างพื้นฐานการสนับสนุนทางเทคนิคทั่วโลก รับบริการทันเวลา พร้อมกับเครื่องมือที่ทันสมัยทางเทคโนโลยีที่สอดคล้องกับมาตรฐานระหว่างประเทศ
สรุปข้อมูลที่สำคัญ
ใน chromatography ยกเว้นขนาด:
- โมเลกุลที่ใหญ่กว่าจะออกไปก่อน เพราะมันไม่สามารถเข้าถึงรูขุมขุมขุมส่วนใหญ่ได้
- สายพันธุ์ขนาดกลางแสดงการรักษาปานกลาง
- สารที่เล็กกว่าออกมาสุดท้ายเนื่องจากการเจาะเข้าไปในแมทริกซ์ที่มีรูพรุน
การออกแบบคอลัมน์รวมถึงการกระจายขนาดรูขุมขุมขุม และเทคนิคการปรับเทียบเพิ่มความแม่นยำต่อไป
การใช้งานรวมถึงการทำความสะอาดโปรตีนไปยังวิทยาศาสตร์โพลีเมอร์
ผู้ผลิตเช่น PERSEE ให้เครื่องมือที่ทันสมัยที่สนับสนุนการกระแสการทำงาน SEC ที่น่าเชื่อถือได้ทั่วโลก
คำถามที่พบบ่อย:
Q1: ประเภทโมเลกุลใดที่ออกมาเป็นครั้งแรกในโครมาโตกราฟียกเว้นขนาด?
ตอบ: โมเลกุลที่ใหญ่กว่า elute ก่อน เพราะพวกเขามีขนาดใหญ่เกินไปที่จะเข้าสู่รูขุมขุมขุมส่วนใหญ่ภายในวัสดุเฟสคงที่; ดังนั้นมันจึงใช้เส้นทางสั้นกว่าผ่านเมทริกซ์คอลัมน์ เมื่อเทียบกับเส้นทางที่เล็ก ๆ ที่กระจายไปยังรูขุมขุมขุมท
Q2: รูปร่างสามารถส่งผลกระทบต่อความสําเร็จ elution แม้ว่าน้ำหนักโมเลกุลจะคล้ายกันได้หรือไม่?
ตอบ: ใช่ การรูปแบบมีความสำคัญอย่างมาก รูปทรงกลมกับเส้นตรงมีอิทธิพลต่อโมเลกุลที่เข้าไปในโครงสร้างรูขุมขุมขุมขุมขุมขุม โปรตีนลูกกลุ่มที่กะทัดรัดอาจพฤติกรรมเหมือนโมเลกุลที่เล็กกว่าเทียบกันที่ขยายไป แม้ว่าจะมีมวลคล้ายกัน
Q3: มันเป็นไปได้หรือไม่ว่าโมเลกุลขนาดเล็กจะปรากฏขึ้นก่อนที่คาดหวัง?
ตอบ: เฉพาะภายใต้เงื่อนไขบางอย่างเท่านั้น เช่น เมื่อมีปฏิสัมพันธ์ระหว่างวิเคราะห์และพื้นผิวเฟสคงที่หรือการปรับเทียบที่ไม อย่างไรก็ตามที่ดีที่สุด สายพันธุ์เล็ก ๆ ควรหลุดไปสุดท้ายภายใต้เงื่อนไข SEC มาตรฐาน เนื่องจากการเข้าถึงสื่อที่มีรูพรุ