
โครมาโตแกรฟียกเว้นขนาด (SEC) หรือที่รู้จักกันในชื่อ โครมาโตแกรฟีการซึมซึมเจล (GPC) เป็นวิธีการวิเคราะห์ที่สำคัญในการจัดเรียงโมเลกุลขนาดใหญ่โดยขนาด ความคิดหลักขึ้นอยู่กับความแตกต่างทางกายภาพ ไม่ใช่ความแตกต่างทางเคมี: อนุภาคจะแยกออกจากการยกเว้นที่แตกต่างกันจากการตั้งค่ารูพรุนของเฟสคงที่ อนุภาคที่ใหญ่กว่าออกมาแรก เนื่องจากมันไม่สามารถเข้าไปในรูขุมขุมขุมขุมในระยะที่คงที่ได้ ในขณะเดียวกัน อนุภาคที่เล็กน้อยกว่า ลื่นเข้าไปในรูขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุมขุ นี่นำไปสู่เวลาที่ยาวนานกว่าก่อนที่พวกเขาจะออก
วิธีนี้ให้ SEC ได้รับประโยชน์พิเศษเมื่อศึกษาโพลิเมอร์ โปรตีน แอนติบอดี้ และอนุภาคนาโน มันทำเช่นนั้นโดยไม่เปลี่ยนรูปแบบธรรมชาติ หรือต้องการพันธุ์ทางเคมีใด ๆ อย่างที่ Held และ Kilz ระบุไว้ว่า "ขนาดยกเว้น chromatography เป็นเทคนิคลักษณะที่สําคัญที่สุดสําหรับโมเลกุลใหญ่"
พารามิเตอร์ใดที่สําคัญสําหรับความแม่นยำในการวิเคราะห์ใน SEC?
คุณต้องเลือกเฟสเคลื่อนที่ด้วยความระมัดระวังเพื่อให้ตัวอย่างอยู่ในรูปร่างที่ดี การแต่งหน้าของบัฟเฟอร์ต้องรองรับตัวอย่าง’ ความมั่นคงและหยุดการผูกพันที่ไม่ต้องการใด ๆ ตัวอย่างเช่น โปรตีนปฏิกิริยาอย่างแข็งแกร่งต่อความแข็งแกร่งของไอออนและระดับ pH ปัจจัยเหล่านี้สร้างรูปแบบของพวกเขาโดยตรง และวิธีที่พวกเขาติดอยู่ในคอลัมน์ การเพิ่มสารเติมแต่งอินทรีย์บางอย่างสามารถลดผลกระทบ hydrophobic เหนียวได้ นี่เป็นประโยชน์โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อทํางานกับโพลิเมอร์ชีวภาพ
ทำไมอัตราการไหลต้องเพิ่มประสิทธิภาพเพื่อความละเอียดที่ดีที่สุด?
อัตราการไหลมีบทบาทสําคัญทั้งในความคมชัดของการแยกและความเร็วของกระบวนการ การไหลที่เร็วขึ้น ลดเวลาที่จําเป็นสําหรับการวิเคราะห์ แต่มันอาจทําให้เกิดอันตรายต่อความชัดเจนของการแยก สิ่งนี้เกิดขึ้นส่วนใหญ่สำหรับอนุภาคใกล้กับขอบเขตการยกเว้น ในทางกลับกัน การไหลที่ช้าลงช่วยเพิ่มคุณภาพการแยก แต่ลากเวลาทั้งหมด ดังนั้นคุณต้องหาทางกลางที่ดี วิธีนี้ คุณจะได้รับผลการวิเคราะห์ที่แข็งแกร่ง โดยไม่สูญเสียประสิทธิภาพ
การปรับเทียบสำคัญแค่ไหนในการประมาณน้ำหนักโมเลกุล?
SEC เองไม่ให้น้ำหนักโมเลกุลที่แม่นยำ แทนมันเดาพวกเขาโดยใช้โค้งที่ทำจากตัวอย่างมาตรฐาน โดยการปรับด้วยมาตรฐานที่รู้จัก คุณสามารถเชื่อมโยงปริมาณ elution กับน้ำหนักโมเลกุล นี่เป็นจริงโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อใช้วิธีการปรับขนาดที่กว้างขวาง เช่น สมการ Grubisic
SEC สามารถนำมาใช้อย่างไรเพื่อเพิ่มความแม่นยำในการวิเคราะห์ในประเภทตัวอย่างที่แตกต่างกัน?
ในการเติบโตของยาชีวภาพ การจับกลุ่มโปรตีนโดดเด่นเป็นการตรวจสอบคุณภาพที่สําคัญ SEC เก็บสารรวมที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูง ที่สำคัญมากในการควบคุมคุณภาพยาชีวภาพ มันแยกโมโนเมอร์จากคู่หรือกลุ่มที่ใหญ่กว่า ซึ่งช่วยประเมินว่าโปรตีนที่มั่นคงยังคงอยู่ภายใต้การตั้งค่าที่แตกต่างกัน นอกจากนี้ ผ่านการวัดอย่างระมัดระวัง มันจะแยกรูปแบบเดียวหลัก จากบิตที่แตกลง
ประโยชน์อะไรที่ SEC ให้บริการสําหรับนานะโนอนุภาคและ Bioconjugates?
อนุภาคนาโนและชีวภาพ conjugates นําปัญหาที่ยาก เนื่องจากการแต่งหน้าที่หลากหลาย SEC สว่างในพื้นที่นี้ เพราะมันเรียงพวกเขาตามรัศมีไฮโดรไดนามิก โดยเฉพาะอย่างยิ่ง มันแบ่งอนุภาคนาโนตามรัศมีไฮโดรไดนามิกของพวกเขา ซึ่งช่วยในการตรวจสอบความสม่ำเสมอของขนาด สําหรับสิ่งที่เช่น แอนติบอดี้-ยา หรือโปรตีนที่เชื่อมโยงกับ PEG มันสามารถแยกรุ่นที่เชื่อมโยงจากรุ่นที่ไม่เชื่อมโยงได้
ปัจจัยเครื่องมืออะไรควรพิจารณาในการตั้งค่า SEC ที่แม่นยำสูง?

การเลือกคอลัมน์ขึ้นอยู่กับช่วงที่คาดหวังของน้ำหนักโมเลกุล และมันเข้ากันทางเคมีได้ดีแค่ไหน คอลัมน์ต้องเหมาะกับช่วงน้ำหนักโมเลกุลที่คาดการณ์เพื่อให้บรรลุความชัดเจนที่ดีที่สุด นอกจากนั้น การตั้งค่าสําหรับระบบที่ใช้น้ำทํางานได้ดีที่สุดสําหรับโปรตีนและโพลีซาการิด ในทางกลับกัน คอลัมน์ที่จัดการตัวทำละลายอินทรีย์เหมาะกับโพลิเมอร์ที่สร้างโดยมนุษย์ เช่น PMMA หรือโพลีสไตรีน ความยาวและความกว้างของคอลัมน์ยังมีส่วนร่วมกับความคมชัดของการแยกและตัวอย่างที่สามารถจัดการได้ในเวลาเดียวกัน
เครื่องตรวจจับใดเพิ่มมูลค่าในการตีความของ SEC?
SEC มักจะร่วมมือกับเครื่องตรวจจับต่างๆ เพื่อให้ผลลัพธ์เข้าใจง่ายขึ้น:
ดัชนีการหัก (RI): นี้ให้การตรวจจับอย่างกว้างขวางสําหรับโพลิเมอร์ คาร์โบไฮเดรต และโปรตีนที่ขาดชิ้นส่วนที่ดูดซับสี
UV/Vis: ช่วยให้การตรวจจับเป้าหมายโดยใช้วิธีที่ตัวอย่างดูดซับแสง
MALS: นี่ให้น้ำหนักโมเลกุลที่แท้จริง โดยไม่ต้องตัวอย่างมาตรฐานสําหรับการปรับ
การใช้งานเหล่านี้ร่วมกัน ช่วยให้คุณรวบรวมข้อมูลในเวลาเดียวกัน ผลที่ได้รับ มันเชื่อมโยงระดับความเข้มข้นกับลักษณะโครงสร้าง ทําให้สามารถแตกต่างได้อย่างเต็มที่จากการทดสอบเพียงครั้งเดียว วิธีการรวมนี้เสริมสร้างความน่าเชื่อถือของข้อมูลที่คุณได้รับอย่างมาก
ใครสามารถให้บริการโซลูชั่นเครื่องมือ SEC ที่น่าเชื่อถือและนวัตกรรม?
ถ้าคุณต้องการนำ SEC เข้าสู่ห้องทดลองของคุณ ด้วยความแม่นยำและความยืดหยุ่นที่สุด เพอร์ส ให้เครื่องมือโครมาโตกราฟิกที่โดดเด่นที่ออกแบบมาสําหรับทั้งห้องปฏิบัติการวิจัยและสถานที่อุตสาหกรรม ก่อตั้งขึ้นเป็นบริษัทเทคโนโลยีสูงที่มุ่งเน้นในเครื่องมือทางวิทยาศาสตร์ในปี 1991 PERSEE ยังคงมีความจริงในการผลักดันไปข้างหน้าในด้านเช่น HPLC FTIRUV / Vis spectrophotometry และ สเปคโทรสโกปีอะตอมมุ่งเน้นที่แข็งแกร่งในการวิจัยแสดงให้เห็นอย่างชัดเจนกว่า 30% ของพนักงานทํางานใน R & amp; D, ปรับปรุงผลิตภัณฑ์เสมอเพื่อตอบสนองความต้องการของผู้ใช้เมื่อสิ่งที่เปลี่ยนแปลงตามเวลา
ภายใน lineup ของพวกเขา ระบบ L600 High Performance Liquid Chromatography โดดเด่นจริงๆ การสร้างที่แข็งแกร่งทําให้มันสมบูรณ์แบบสําหรับงานรายละเอียด SEC ระบบจะรับประกันการควบคุมการไหลอย่างแม่นยำซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสําหรับการได้รับผลลัพธ์ที่ซ้ำได้ในการแยกตามขนาดโมเลกุล นอกจากนี้ PERSEE ยังช่วยนักวิทยาศาสตร์ทั่วโลกด้วยความช่วยเหลือในการตั้งค่า การฝึกอบรม และการบำรุงรักษา พวกเขาทำเช่นนี้ผ่านเครือข่ายผู้จัดจำหน่ายที่แข็งแกร่งทั่วโลก ทําให้การสนับสนุนเข้าถึงได้ง่ายไม่ว่าคุณจะอยู่ที่ไหน
SEC มีส่วนร่วมในการวิเคราะห์ความแม่นยำทั่วอุตสาหกรรมอย่างไร?
SEC’ ทักษะในการแยกโมเลกุลเพียงตามขนาดของมัน ทั้งหมดในขณะที่รักษาสภาพพื้นเมือง เปลี่ยนมันเป็นเครื่องมือที่จําเป็นสำหรับการตรวจสอบความบริสุทธิ์ มันจะพบความแตกต่างระหว่างชนิดโมเลกุลต่างๆ อย่างน่าเชื่อถือ ซึ่งเพิ่มความแข็งแรงของการตรวจสอบความบริสุทธิ์ในหลายวิธี SEC แสดงความมีประโยชน์ที่กว้างขวาง จากการระบุลักษณะของโพลิเมอร์ในวิทยาศาสตร์วัสดุ ไปจนถึงการค้นหาสารรวมในยาชีวภาพ และการปรับขนาดอนุภาคนาโนในนาโนแพทย์ มันเข้ากับหลายสาขาได้อย่างราบรื่น รวมถึงยา วิทยาศาสตร์วัสดุ และเทคโนโลยีชีวภาพ ในทุกพื้นที่เหล่านี้ มันจัดการกับความต้องการที่หลากหลายด้วยประสิทธิภาพที่สม่ำเสมอ ปรับตัวเข้ากับความท้าทายเฉพาะในแต่ละพื้นที่ในขณะที่รักษา การเชื่อมต่อ SEC กับเครื่องมือเช่น MALS หรือ UV ใช้ความสามารถในการวัดปริมาณไปยังระดับสูงขึ้น การจับคู่นี้ช่วยเพิ่มความน่าเชื่อถือของตัวเลขที่คุณได้รับ
คำถามที่พบบ่อย
Q1: Chromatography ยกเว้นขนาดแตกต่างจาก chromatographic อื่น ๆ อย่างไร เทคนิค?
A1: ไม่เหมือนการแลกเปลี่ยนไอออนหรือครอมาโตกราฟีเฟสย้อนกลับที่พึ่งพาปฏิสัมพันธ์ทางเคมี SEC แยกวิเคราะห์โดยใช้ขนาดไฮโดรไดนามิกของพวกเขาโดยใช้เมทริกซ
Q2: ความท้าทายที่พบบ่อยในการบรรลุผลที่ถูกต้องโดยใช้ SEC คืออะไร?
A2: ความท้าทายรวมถึงการปฏิสัมพันธ์ที่ไม่เฉพาะกับเฟสคงที่, มาตรฐานการปรับเทียบที่ไม่เหมาะสมสําหรับตัวอย่างที่ซับซ้อน, และอัตราการไหล
Q3: สามารถใช้ chromatography ยกเว้นขนาดสำหรับทั้งน้ำและอินทรีย์ ระบบ?
A3: ใช่ขึ้นอยู่กับวัสดุเฟสคงที่ใช้ คอลัมน์ที่เข้ากันได้กับน้ำเหมาะสําหรับโปรตีนและโพลีซาคาริด ในขณะที่คอลัมน์ที่เข้ากันได้กับอินทรีย์ถูกใช้สําหรับโพล