Хроматография исключения размера (SEC), также известная как гелевая проникновенная хроматография (GPC), служит ключевым аналитическим методом для сортировки макромолекул исключительно по их гидродинамическим размерам. Основная идея основывается на физических, а не химических различиях: частицы отделяются через различное исключение из пористой структуры стационарной фазы. Большие частицы выходят сначала, так как они не могут войти в поры в стационарной фазе. Между тем мелкие частицы проскальзываются в эти поры и двигаются медленнее вдоль колонны. Это приводит к более длительному времени до их выхода.
Этот подход дает SEC особые преимущества при изучении полимеров, белков, антител и наночастиц. Это делается без изменения их естественной формы или необходимости в каких-либо химических связях. Как отметили Хелд и Кильз, «хроматография исключения размера является наиболее важным методом характеризации макромолекул».
Какие параметры имеют решающее значение для точности анализа в SEC?
Вы должны выбрать мобильную фазу с большой осторожностью, чтобы сохранить образец в хорошей форме. Макияж буфера должен поддерживать образец’ с стабильность и остановить любые нежелательные связки. Например, белки сильно реагируют на силу ионов и уровень рН. Эти факторы непосредственно формируют их форму и то, как они привязываются в колонке. Добавление определенных органических добавок может уменьшить липкие гидрофобные эффекты. Это особенно полезно при работе с биологическими полимерами.
Почему скорость потока должна быть оптимизирована для лучшего разрешения?
Скорость потока играет важную роль как в резкости разделения, так и в скорости процесса. Более быстрые потоки сокращают время, необходимое для анализа, но они могут нанести ущерб ясности разделения. Это происходит в основном для частиц, близких к пределу исключения. С другой стороны, более медленные потоки повышают качество разделения, но затягивают общее время. Поэтому нужно найти хорошую середину. Таким образом, вы получаете сильные аналитические результаты, не теряя эффективности.
Насколько важна калибровка при оценке молекулярного веса?
Сама SEC не дает точных молекулярных весов. Вместо этого он угадает их, используя кривые, сделанные из стандартных образцов. Калибрируя по известным стандартам, вы можете связать объемы элюции с молекулярными массами. Это особенно верно при применении широких методов калибровки, таких как уравнение Грубиса.
Как SEC может применяться для повышения точности анализа различных типов образцов?
При росте биофармацевтических препаратов обнаружение белковых скоплений выделяется как жизненно важная проверка качества. SEC выбирает агрегаты высокого молекулярного веса, которые очень важны для контроля качества биофармацевтических препаратов. Он расщепляет мономеры из пар или больших групп, что помогает оценить, насколько стабильные белки остаются в различных установках. Кроме того, благодаря тщательному измерению он отличает основные отдельные формы от разбитых битов.
Какие преимущества предлагает SEC для наночастиц и биоконъюгатов?
Наночастицы и биоконъюгаты вызывают сложные проблемы из-за их разнообразного состава. SEC сияет в этой области, поскольку сортирует их по гидродинамическому радиусу. В частности, он делит наночастицы в соответствии с их гидродинамическим радиусом, что помогает в проверке равномерности размеров. Для таких вещей, как конъюгаты антител-лекарства или белки, связанные с ПЭГ, он может отделить связанные версии от несвязанных.
Какие инструментальные факторы следует учитывать при высокоточных настройках SEC?
Выбор колонки зависит от ожидаемого диапазона молекулярных масс и того, насколько хорошо она соответствует химически. Колонни должны соответствовать прогнозируемому диапазону молекулярного веса для достижения максимально возможной ясности. Кроме того, настройки, предназначенные для систем на водной основе, лучше всего работают для белков и полисахаридов. Напротив, колонны, которые обрабатывают органические растворители, подходят для искусственных полимеров, таких как ПММА или полистирол. Длина и ширина колонки также играют роль в остроте разделения и в том, сколько образца она может обрабатывать одновременно.
Какие детекторы добавляют ценность к интерпретации SEC?
SEC часто объединяется с различными детекторами, чтобы сделать результаты более понятными:
Индекс преломления (RI): это обеспечивает широкое обнаружение полимеров, углеводов и белков, у которых нет цветопогляжающих частей.
UV/Vis: позволяет целенаправленное обнаружение, используя способ, которым образцы поглощают свет.
MALS: Это дает истинный молекулярный вес без необходимости стандартных образцов для калибровки.
Использование их вместе позволяет собирать данные одновременно. В результате он связывает уровни концентрации со структурными чертами, что позволяет полностью разрушиться всего за один испытательный запуск. Этот комбинированный подход значительно укрепляет надежность полученных вами данных.
Кто может предоставить надежные и инновационные решения для приборов SEC?
Если вы хотите привести SEC в вашу лабораторию с высочайшей точностью и гибкостью, Перси предоставляет выдающийся выбор хроматографических инструментов, предназначенных как для исследовательских лабораторий, так и для промышленных установок. Основанная как высокотехнологичная компания, сосредоточенная на научных инструментах еще в 1991 году, PERSEE осталась верной продвижению вперед в таких областях, как HPLC, GC, FTIRУФ/Вис спектрофотометрия и атомная спектроскопияИх сильное сосредоточение на исследованиях ясно показывает, что более 30% сотрудников работают в R& D, всегда улучшая продукты, чтобы удовлетворить потребности пользователей, поскольку вещи меняются со временем.
В их линейке, в Система высокопроизводительной жидкостной хроматографии L600 Действительно выделяется. Его прочная конструкция делает его идеальным для подробных задач SEC. Система обеспечивает точный контроль за потоком, что имеет решающее значение для получения повторяемых результатов в разделении на основе молекулярного размера. Кроме того, PERSEE помогает ученым по всему миру с практической помощью в установке, обучении и техническом обслуживании. Они делают это через прочную сеть дистрибьюторов по всему миру, что делает поддержку легко доступной независимо от того, где вы находитесь.
Как SEC способствует аналитической точности во всех отраслях?
SEC’ Умение отделять молекулы только по их размеру, сохраняя при этом местные условия, превращает его в необходимый инструмент для проверки чистоты. Он надежно обнаруживает различия между различными молекулярными типами, что повышает прочность проверок чистоты во многих отношениях. SEC демонстрирует свою широкую полезность от характеризации полимеров в науке о материалах до поиска агрегатов в биофармацевтических препаратах и измерения размеров наночастиц в наномедицине. Он легко вписывается во многие области, включая фармацевтику, материаловедение и биотехнологию. Во всех этих областях он решает различные потребности с последовательной производительностью, адаптируясь к конкретным задачам в каждой из них, сохраняя при этом высокие стандарты точности и надежности. Связывание SEC с такими инструментами, как MALS или UV, позволяет измерять количества на более высокий уровень. Эта пара повышает надежность полученных цифр.
Часто задаваемые вопросы
Q1: Как хроматография исключения размера отличается от других хроматографических Техники?
A1: В отличие от ионообмена или обратной фазной хроматографии, которые опираются на химические взаимодействия, SEC отделяет аналиты исключительно на основе их гидродинамического размера с использованием пористой матрицы.
Вопрос 2: Каковы общие проблемы в достижении точных результатов с помощью SEC?
A2: К числу проблем относятся неспецифические взаимодействия со стационарной фазой, ненадлежащие стандарты калибровки для сложных образцов и субоптимальные условия потока или мобильной фазы.
Q3: Можно использовать хроматографию исключения размера как для водных, так и для органических системы?
A3: Да, в зависимости от используемого материала стационарной фазы; Водные совместимые колонны подходят для белков и полисахаридов, в то время как органические совместимые колонны используются для синтетических полимеров, таких как полистирол или ПММА.
