High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) adalah alat utama bagi para ilmuwan. Hal ini memungkinkan mereka untuk memisahkan, mengidentifikasi, dan mengukur berbagai bagian campuran. Teknik ini bergantung pada bagaimana molekul sampel berinteraksi dengan cairan (fase mobile) dan padat (fase stasioner). HPLC dikenal karena memberikan hasil yang tepat dan stabil. Hal ini membuatnya sangat penting di banyak bidang, mulai dari farmasi hingga keamanan makanan. Tetapi mendapatkan data berkualitas adalah’ t yang diberikan. Ini membutuhkan sistem HPLC yang dipelihara dengan baik yang berfungsi terbaik.
Panduan ini menawarkan rencana sederhana, langkah demi langkah untuk menemukan dan memecahkan masalah umum. Mengikuti tips ini akan membantu Anda mendapatkan data yang lebih baik dan meningkatkan sistem Anda’ Performa keseluruhan.
Masalah Umum dalam Operasi HPLC
Mengetahui tanda-tanda masalah adalah langkah pertama untuk memperbaikinya.
Baseline Noise and Drift: Baseline Anda mungkin menunjukkan lonjakan acak (noise) atau lereng yang lambat dan stabil (drift). Hal ini dapat dengan mudah menyembunyikan puncak kecil. Hal ini juga membuat mendapatkan hasil yang akurat jauh lebih sulit. Penyebab biasa adalah fase mobile kotor, ayunan suhu, atau lampu detektor yang lemah.
Pergeseran waktu retensi: Sebuah senyawa mungkin melepaskan lebih awal atau lebih lambat dari yang diharapkan. Inkonsistensi ini membuat hasil sulit diulang. Ini’ Seringkali karena perubahan kecil dalam fase mobile Anda, kolom lama, pompa yang tidak stabil, atau perubahan suhu.
- Bentuk puncak yang buruk (Tailing, Fronting, Splitting):
- Tailing: puncak ekor memiliki ujung yang panjang dan miring. Hal ini dapat terjadi karena dua alasan utama. Anda mungkin menyuntikkan terlalu banyak sampel, atau senyawa Anda menempel pada kemasan kolom.
- Fronting: puncak depan terlihat didorong ke depan. Ini adalah tanda umum bahwa pelarut sampel Anda jauh lebih kuat daripada fase mobile Anda.
- Pemisahan: Puncak terpisah terlihat seperti dua puncak yang digabungkan menjadi satu. Ini menandakan masalah. Ini bisa menjadi masukan kolom yang tersumbat sebagian, kekosongan dalam kemasan kolom, atau injeksi yang buruk.
- Fluktuasi tekanan dan blokade:
- A Steady, Slow Rise: Ini sering menunjukkan penyumbatan secara bertahap. Partikel kecil dari sampel Anda mungkin membangun di bagian depan kolom atau pada filter.
- Lonjakan tekanan tiba-tiba: Lonjakan tekanan yang tajam biasanya berarti penyumbatan besar baru saja terjadi.
- Penurunan tekanan atau ketidakstabilan: Penurunan tekanan cepat hampir selalu menandakan kebocoran. Jika tekanan hanya melompat, Anda mungkin memiliki gelembung udara di pompa.
Pemecahan Masalah Sistematis Komponen HPLC
Untuk memecahkan masalah dengan baik, Anda membutuhkan rencana yang terorganisir. Periksa setiap bagian sistem satu per satu.
- Fase Mobile
Ini adalah darah hidup dari sistem Anda. Ini juga merupakan sumber masalah yang sangat umum.
Kualitas pelarut: Selalu mulai dengan pelarut HPLC kelas kemurnian tinggi. Buat fase mobile Anda segar. Kekotoran menyebabkan sinyal tambahan yang tidak diinginkan seperti kebisingan dasar atau puncak hantu.
Masalah pH dan Buffer: pH fase mobile Anda harus stabil dan benar. Bahkan pergeseran kecil dapat sangat mempengaruhi waktu retensi. Juga, pastikan bahwa setiap buffer benar-benar larut dan disaring sebelum digunakan.
Degassing: gelembung gas kecil dapat menyebabkan masalah besar. Mereka menyebabkan tekanan yang tidak stabil dan lonjakan di garis dasar Anda. Pastikan untuk degas fase mobile Anda dengan baik dengan degasser bawaan, helium sparging, atau dengan menempatkannya di bak mandi ultrasonik.
- Kolom HPLC
Kolom melakukan semua pekerjaan pemisahan. Kondisinya kritis.
Kontaminasi dan Penuaan: Kolom menjadi kotor dengan penggunaan. Bagian-bagian yang mengikat sampel Anda dapat menempel pada kemasan. Hal ini menyebabkan tekanan yang lebih tinggi dan bentuk puncak yang buruk. Fase stasioner juga dapat pecah dari waktu ke waktu, terutama pada pH yang sangat tinggi atau rendah.
Instalasi yang buruk: Kolom yang tidak terhubung dapat menyebabkan masalah. Ini bisa bocor atau membuat “ volume mati” di mana sampel dapat terjebak, mengarah ke puncak lebar atau terbagi.
- Pompa dan Injektor
Bagian-bagian ini bertanggung jawab untuk aliran yang stabil dan pengenalan sampel yang bersih.
Pompa Seals dan Check Valves: Seal pompa yang usang sering menyebabkan kebocoran dan masalah tekanan. Katup cek yang rusak menyebabkan aliran yang tidak stabil. Hal ini membuat waktu retensi Anda tidak dapat diandalkan.
Masalah Injektor dan Autosampler: Injektor kotor dapat membuat puncak terbagi atau ekor. Dengan autosampler, jarum bengkok dapat merusak injeksi. Ini’ s juga penting untuk menggunakan pelarut cuci yang baik untuk mencegah pengangkutan sampel.
- Detektornya
Detektor’ Kinerja adalah kunci untuk mendapatkan data berkualitas.
Kinerja Lampu: Dalam detektor UV, lampu lama menjadi redup. Hal ini menambah lebih banyak kebisingan dan membuat detektor kurang sensitif. Anda juga harus memeriksa kalibrasi panjang gelombang sesekali.
Masalah Sel Aliran: Gelembung udara yang terjebak dalam sel aliran menciptakan lonjakan besar dan tajam pada garis dasar. Jika sel aliran kotor, itu dapat membuat garis dasar drift.
Pemeliharaan Pencegahan untuk Operasi HPLC yang Handal
Pemeliharaan teratur adalah cara terbaik untuk mencegah masalah. Ini membantu mesin Anda bertahan lebih lama. Ini juga memastikan Anda mendapatkan hasil yang dapat Anda percayai.
Daftar Pemeliharaan Pencegahan:
Setiap hari: Periksa kadar pelarut setiap hari. Carilah kebocoran dan perhatikan tekanan sistem. Sangat penting juga untuk membilas sistem setelah menggunakan penyangga untuk mencegah penumpukan garam.
Setiap Minggu: Hapus bagian luar mesin. Periksa lampu detektor’ s kinerja untuk melihat apakah itu’ menjadi dim.
Setiap Bulan: Buat rencana untuk mengganti bagian yang dapat digunakan, seperti segel pompa dan filter inline. Perhatikan pipa untuk tanda-tanda kerusakan.
Memperkenalkan PERSEE: Produsen Instrumen Analisis Terpercaya
Dalam pasar yang sulit, peralatan yang tepat membuat semua perbedaan. Persee adalah mitra yang dapat diandalkan yang menawarkan solusi analitis yang kuat. Dengan fokus yang jelas pada ide-ide baru, PERSEE menggabungkan manufaktur canggih dengan R& Tim D. Hal ini menjamin setiap instrumen memberikan kinerja dan kehandalan terbaik.
Garis produk mereka menunjukkan dedikasi ini. Contoh yang baik adalah versatilitas Sistem Kromatografi Cairan Kinerja Tinggi L600. L600 dibangun untuk pekerjaan laboratorium sehari-hari yang praktis. Ini memiliki antarmuka yang mudah digunakan dan desain modular, sehingga dapat tumbuh sesuai dengan kebutuhan Anda. Perangkat kerasnya yang keras cocok untuk banyak penggunaan, dari analisis obat hingga pengujian keamanan makanan.
Kesimpulan
Pekerjaan HPLC yang baik adalah campuran ilmu pengetahuan dan keterampilan praktis. Dengan mengikuti rencana yang logis, Anda dapat memecahkan sebagian besar masalah dengan cepat. Periksa fase mobile, lalu kolom, lalu pompa dan detektor. Tapi yang lebih penting adalah pemeliharaan reguler. Ini’ Cara terbaik untuk menghindari penutupan kejutan. Komitmen sederhana ini adalah faktor paling penting untuk mendapatkan hasil yang akurat dan dapat diulang dalam jangka panjang.
Pertanyaan yang Sering Diajukan (FAQ)
Q1: Apa penyebab paling umum dari puncak ekor dalam HPLC?
A: Peak tailing biasanya terjadi karena interaksi yang tidak diinginkan antara analit Anda (terutama jika mereka asam atau dasar) dan bahan silika di kolom. Menggunakan kolom modern yang tertutup atau menyesuaikan pH fase mobile sering memecahkan hal ini. Alasan utama lainnya adalah menyuntikkan terlalu banyak sampel, yang dapat diperbaiki dengan mengencerkan sampel Anda.
Q2: Seberapa sering saya harus melakukan pemeliharaan pada sistem HPLC saya?
A: Ini benar-benar tergantung pada berapa banyak Anda menggunakannya. Untuk laboratorium yang sibuk, itu’ adalah ide yang baik untuk melakukan pemeriksaan cepat setiap hari (tingkat pelarut, tekanan). Rencanakan inspeksi mingguan dan gantikan bagian yang umum dipakai seperti segel pompa dan filter setiap bulan, terutama jika sistem berjalan terus menerus.
Q3: Garis dasar saya mengapung meskipun pelarut saya telah degas. Apa yang bisa menjadi penyebabnya?
J: Jika Anda yakin fase mobile Anda telah degas, hal berikutnya yang harus diperiksa adalah suhu. Garis dasar yang mengapung sering disebabkan oleh perubahan suhu di sekitar detektor atau kolom. Pastikan suhu oven kolom stabil. Kemungkinan lain termasuk kolom lama yang mulai “ berdarah” fase stasioner atau sel aliran detektor kotor.
