Principio
Después de colocar la solución de almidón en la solución de muestra de miel, algo de almidón es hidrólisis por diastasa en miel.
Reactivos y material
Excepto aquellos con notificación específica, se utilizan reactivos de grado AR;
Reactivo:
1. Yodo.
2. Yoduro de potasio.
3. Acetato de sodio (CH3COONA · 3H2O).
4. Ácido de acetato helado
5. Cloruro de sodio.
6. almidón soluble.
7. Solución madre de yodo: pese 8.8 g de yodo y 22 g de yoduro de potasio, mezclando con 30 ml de agua, diluido a 1000 ml.
8. Solución de yodo: pese 20 g de yodo de potasio, agregue 5 ml de solución madre de yodo, diluya a 500 ml por agua (esta solución solo se puede usar durante 2 días).
9. Solución tampón de acetato: pH 5,3 (1,59 mol/L). Pesar 87 g de acetato de sodio y diluir en 400 ml de agua. Añadir 10,5 ml de ácido acético helado y diluir hasta 500 ml. Si es necesario, usar acetato de sodio o ácido acético para ajustar el pH a 5,3.
10. Solución de cloruro de sodio (0,5 mol/L): pesar 14,5 g de NaCl, disolver en 500 mL de agua.
11. Solución de almidón: disuelva 2G con almidón soluble en agua de 90 ml.
Equipo:
1. Espectrofotómetro UV-vis.
2. Soporte de celda de temperatura constante
Preparación y conservación de la muestra
Preparación de la muestra:
Revuelva bien la muestra, luego transfiera 0.5 kg a una botella de muestra como muestra de prueba.
Nota: Si el cristal aparece o no, toda la muestra no se puede calentar.
Preserve de muestra:
La muestra se puede conservar a temperatura ambiente.
Procedimiento experimental
Prueba estándar de la solución de almidón
Mida 5.0 ml de solución de almidón (reactivo 11) y 10.0 ml de agua, colóquelo en 40 ℃ Baño de agua por separado durante 15 minutos.
Prueba de muestra:
1. Condiciones del espectrofotómetro:
a) longitud de onda: 660 nm
b) Referencia: agua
2. Pretratamiento de la muestra: Medida 5G (± 0.01g) Muestra preparada y transfiriendo a un vaso de precipitados de 20 ml.
3. Medir 5 ml de solución de almidón, solución de muestra de 10 ml (prueba de muestra 2) y 10 ml de solución de yodo, colóquelo en 40 ℃ Baño de agua por separado durante 15 minutos.
4. Después de 5 minutos, transfiera 1.0 ml de solución mixta a una solución de yodo calentada de 10 ml, y diluya con la cantidad registrada de agua (registrada en el paso de solución de almidón estándar) y mezcle bien nuevamente.
5. Si la absorbancia es mayor que 0.235, el cuarto paso debe repetirse hasta que la absorbancia sea inferior a 0.235.
6. Durante la medición, la solución mixta, la solución de yodo y el agua deben mantenerse en 40 ℃ Baño de agua.
Cálculo
En un papel de coordenada logarítmica, nombre el eje Y como absorbancia (%) y eje X como tiempo (min).
Donde x es el número de diastasa en solución (ml/(g · h)), t es el tiempo correspondiente (min).
Resultados
Al usar este método, la repetibilidad y la reproducibilidad del experimento son ≥95%.
