응용 프로그램

실험 목표
실험적으로 크로마토 그래피 분석의 기본 원리와 기기의 기본 작동을 배우고 데이터 분석 프로세스를 이해하십시오.
크로마토 그래피 정량적 방법에 대해 배우고 다른 방법의 장점과 단점을 비교하십시오.

HPLC 소개
고속 : HPLC는 고압 주입 장비를 사용하고 유량이 크게 증가하며 분석 속도는 매우 빠르며 일반적으로 몇 분 밖에 걸리지 않습니다.
효율 : 필러 입자는 매우 미세하고 규칙적이며 고정 상의 코팅은 균일하고 질량 전달 저항은 작기 때문에 컬럼 효율이 매우 높습니다.
높은 감도 : 검출기는 매우 민감합니다 : UV-10-9G, 형광 검출기 -10-11g.

GC와의 비교 HPLC

객체 및 분석 범위 : GC 분석은 가스 및 낮은 보일링 안정 화합물로 제한되며, 이는 총 유기물의 20%에 불과합니다.

이동 단계 선택 : GC는 모바일 상으로 제한된 선택적인 종류의 "비활성"가스를 사용하며 구성 요소에 작은 영향을 미칩니다.

작동 온도 : GC에는 고온이 필요합니다.
응용 프로그램 필드
높은 감도, 정량적 정확도 및 비 휘발성 및 열적으로 불안정한 성분의 분석에 적합하기 때문에 HPLC 분리 분석은 산업 및 과학적 연구, 특히 생물학 및 의학에서 매우 다양합니다.

HPLC 구조 및 원리

그림 1 HPLC 구조

HPLC는 펌프 시스템, 주입 시스템, 분리 시스템, 탐지기 및 데이터 처리 시스템으로 구성됩니다.

고압 주입 시스템
1) 이동성 병 : 1-2L 유리 병 1-2L 유리 병 (NI 합금), 기공은 대략 2 μm이며 미립자가 펌핑되는 것을 방지합니다.
2) Degasser : 초음파 탈기 또는 진공 가열 Degassing.

3) 고압 펌프 : 주입 펌프의 요구 사항 : 우수한 밀봉, 유입이없는 안정적인 흐름, 넓은 조절 가능한 범위 및 부식 저항.

주입 시스템

수동 인젝터 또는 자동 샘플러

그림 2 주입 원리

열 분리 시스템

그림 2 분리 원리

그림 3 UVD

분리 원리
크로마토 그래피 공정 : 2 개의 불가능한 상, 이동 상 및 고정 상이있는 시스템에서, 세 번째 성분 (즉, 용질 또는 흡착 물)은 두 상 사이에 지속적으로 대안적인 분포입니다.
이동 상, 고정 상 및 용질 혼합물의 특성의 차이로 인해 성분은 크로마토 그래피 공정 동안 다른 크로마토 그래피 거동을 나타내므로 구성 요소가 서로 분리됩니다.

해결

용리의 해상도는 크로마토 그래피 분리에서 2 개의 용리 피크가 얼마나 잘 분화 될 수 있는지에 대한 정량적 측정입니다.

수정 계수
크로마토 그래피의 정량 분석은 성분의 양이 피크 면적에 비례한다는 사실에 기초합니다.

체중 교정 계수 ：

정량적 방법
외부 표준 방법
교정 곡선은 다음 방정식에 따라 설정할 수 있습니다.

정기적 인 분석에 적용됩니다
장점 : 쉽게 작동 및 계산
부족 : 결과의 정확성은 주입의 반복성 및 작동 조건의 안정성에 따라 다릅니다.

내부 표준 방법

내부 표준으로 일정량의 순수한 물질을 샘플에 추가하십시오.

애플리케이션 범위 : 샘플의 여러 구성 요소 만 결정하며 구성 요소의 모든 피크가 흐를 수있는 것은 아닙니다.
장점 : 정규화 방법보다 운영 조건의 영향, 프리저 및 제한이 적은 미량 분석에 적합합니다.
부족 : 빠른 분석에 부적합합니다.

주사기

GC 주사기의 바늘은 날카 롭고 LC 주사기의 바늘은 평평합니다.

실험

실험 조건
1) 메탄올의 모바일 단계 : 물 = 90:10, 80:20 및 70:30의 상이한 비율로 10μl 혼합 표준 용액 (메틸 파라벤, 프로필 파라벤 및 부틸 파라벤)을 주입하여 다양한 구성 요소와 1.5보다 큰 수정 시간과 최상의 보유 시간을 선택하기 위해 다양한 구성 요소 간의 해상도를 테스트하기 위해 메탄올의 상이한 비율 : 물 = 90:10, 80:20 및 70:30을 주입한다.
참고 : 이동 단계를 변경할 때마다 크로마토 그래피 시스템의 균형을 잡기 위해 약 5 분 동안 기다려야합니다 (신호 및 압력 라인이 모두 균형을 이룹니다).
2) 0.8, 1.0 및 1.5 ml의 다른 이동 상 유량에서 10 μl 혼합 표준 용액 (메틸 파라벤, 프로필 파라벤 및 부틸 파라벤)을 주입하여 최적의 이동 상 흐름 속도를 선택한 최적의 이동성 위상 비율 주입 분석.

질적 분석
최적의 실험 조건 하에서, 각각의 메틸 파라벤, 프로필 파라벤 및 부틸 파라벤 각각 10 μl를 주입하고 각 피크의 체류 시간이 기록된다.

정량 분석
교정 곡선
최적의 실험 조건 하에서, 혼합 표준 샘플의 2, 5, 8, 10, 15 및 20 μl를 주사 및 분석하고, 표준 곡선은 주입 부피 및 피크 면적에 의해 확립된다.
이 곡선의 상관 계수는 0.99보다 크기가 필요합니다.

알 수없는 샘플 분석
10 μl 미지의 샘플을 테스트하여 교정 곡선에 의한 정량 분석을 테스트합니다.

질문
실험 데이터에 기초하여, 가스 크로마토 그래피와 액체 크로마토 그래피 사이의 분석 방법의 차이를 논의하십시오.
HPLC 분석의 적용 값을 탐색하십시오.
UV 검출기가 모든 유기 화합물을 검출하는 데 적합한 지 여부?