アプリケーション

実験目標
実験により、クロマトグラフィー分析の基本原則と機器の基本的な操作を学び、データ分析のプロセスを理解します。
クロマトグラフィーの定量的方法について学び、さまざまな方法の長所と短所を比較します。

HPLCはじめに
高速：HPLCは高圧注入装置を使用し、流量は大幅に増加し、分析速度は非常に高速で、一般的に数分しかありません。
効率的：フィラー粒子は非常に細かく規則的で、定常相のコーティングは均一であり、物質移動抵抗は小さく、カラムの効率は非常に高くなっています。
高感度：検出器は非常に敏感です：UV-10-9g、蛍光検出器-10-11g。

GCとの比較HPLC

分析のオブジェクトと範囲：GC分析は、ガスと低ボーリングの安定した化合物に限定されており、これは全有機物の20％のみを占めています。

移動相の選択：GCは、移動相として限定的なオプションの種類の「不活性」ガスを使用し、コンポーネントにわずかな影響を及ぼします。

動作温度：GCには高温が必要です。
アプリケーションフィールド
高感度、定量的精度、および非揮発性および熱的に不安定な成分の分析に適しているため、HPLC分離分析は、産業および科学的研究、特に生物学と医学において非常に用途が広いです。

HPLC構造と原則

図1 HPLC構造

HPLCは、ポンプシステム、注入システム、分離システム、検出器、およびデータ処理システムで構成されています。

高圧注入システム
1）移動相ボトル：溶媒フィルター（Ni合金）を備えた1-2Lガラスボトル、その孔は約2μmであり、微粒子が汲み上げられないようにします。
2）脱ガッサー：超音波の脱ガスまたは真空加熱の脱ガス。

3）高圧ポンプ：注入ポンプの要件：良好なシーリング、流入のない安定した流れ、幅広い調整可能な範囲、耐食性。

注入システム

手動インジェクターまたは自動サンプラー

図2注入原理

列分離システム

図2分離原理

図3UVD

分離原理
クロマトグラフィープロセス：移動相、および固定相の2つの不混和相を備えたシステムでは、3番目の成分（つまり、溶質または吸着剤）は、2つのフェーズ間の連続的に代替分布です。
移動相、固定相、溶質混合物の特性の違いにより、コンポーネントはクロマトグラフィープロセス中に異なるクロマトグラフィー挙動を示し、コンポーネントが互いに分離されます。

解決

溶出の解像度は、クロマトグラフィー分離で2つの溶出ピークをどれだけうまく区別できるかを定量的に測定することです。

補正係数
クロマトグラフィーの定量分析は、コンポーネントの量がピーク領域に比例することに基づいています。

体重補正係数：

定量的方法
外部標準メソッド
キャリブレーション曲線は、次の方程式に従って確立できます。

定期的な分析に適用されます
利点：簡単な操作と計算
不足：結果の精度は、注入の再現性と動作条件の安定性に依存します。

内部標準メソッド

内部標準としてサンプルに一定量の純粋な物質を追加します。

アプリケーション範囲：サンプルのいくつかのコンポーネントのみを決定し、コンポーネントのすべてのピークを流れるわけではありません
利点：運用条件の影響が少なく、多くの洗練され、正規化方法よりも制限が少ない、トレース分析に適しています
不足：迅速な分析には適さない。

シリンジ

GCシリンジの針は鋭く、LCシリンジの針は平らです。

実験

実験条件
1）メタノールのさまざまな比率の携帯フェーズで10μL混合標準溶液（メチルパラベン、プロピルパラベン、およびブチルパラベン）を注入します。
注：移動相を変更するたびに、クロマトグラフィーシステムのバランスをとるために約5分間待つ必要があります（信号ラインと圧力ラインの両方がバランスが取れています）。
2）0.8、1.0、および1.5 mL {{url_placeholder_0}}の異なる移動相流量に10μlの混合標準溶液（メチルパラベン、プロピルパラベン、およびブチルパラベン）を注入し、最適な移動相噴射注射分析で、同じ原則が最良の移動相流量を選択しました。

定性分析
最適な実験条件下では、メチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベンのそれぞれ10μlを注入し、各ピークの保持時間を記録します。

定量分析
キャリブレーション曲線
最適な実験条件下では、2、5、8、10、15、および20μLの混合標準サンプルを注入して分析し、標準曲線は注入容積とピーク面積によって確立されます。
この曲線の相関係数は0.99を超える必要があります。

未知のサンプル分析
10μL未知のサンプルをテストするために注入し、キャリブレーション曲線による定量分析。

質問
実験データに基づいて、ガスクロマトグラフィーと液体クロマトグラフィーの間の分析方法の違いについて説明します。
HPLC分析のアプリケーション値を調べます。
UV検出器がすべての有機化合物を検出するのに適しているかどうか？