高性能液体色谱（HPLC）は科学者にとって重要なツールです。混合物の異なる部分を分離,識別,測定することができます.この技術は、サンプル分子が液体（移動相）と固体（静止相）とどのように相互作用するかに依存します。HPLCは正確で安定した結果を与えることで知られています。これは、医薬品から食品安全まで多くの分野で重要です。しかし、品質データを取得することは’t が与えられる。良く維持されているHPLCシステムが必要です。
このガイドは、一般的な問題を見つけ、解決するためのシンプルでステップバイステップの計画を提供します。これらのヒントに従って、より良いデータを取得し、システムを改善するのに役立ちます’全体的なパフォーマンス。
HPLC操作における一般的な問題
問題の兆候を知ることは、それを修正するための最初のステップです。
ベースラインノイズとドリフト：ベースラインはランダムなスパイク（ノイズ）または遅く安定した傾斜（ドリフト）を示す可能性があります。小さなピークを簡単に隠すことができます。正確な結果を得ることも難しい。通常の原因は、汚れた移動相、温度変動、または弱い検出器ランプです。
保持時間シフト：化合物は予想より早くまたは遅く脱出する可能性があります。この不一致性は、結果を繰り返すことが難しい。それ’移動相のわずかな変化、古い柱、不安定なポンプ、または温度変化による場合が多い。
- 悪いピークの形（尾、フロント、分割）:
- 尾: 尾のピークは長く、傾斜した端を持っています。これは2つの主要な理由で起こることができます。サンプルを注入すぎるかもしれませんか 化合物が柱のパッキングに粘着しているかもしれません
- フロント：フロントピークは前方に押し込まれています。これは、サンプル溶媒が移動相よりはるかに強いという一般的な兆候です。
- 分割：分割されたピークは、2つのピークが1つに合わせられたようです。これは問題を示している。部分的に閉じ込まれた柱の入口,柱のパッキングの空白,または悪い注射です.
- 圧力変動とブロック：
- 安定した遅い上昇：これはしばしば徐々に閉塞を示しています。サンプルからの小さな粒子は,柱の前部またはフィルターに蓄積されているかもしれません.
- 急激な圧力スパイク：圧力の急激なジャンプは、通常、大きな阻塞が起こったことを意味します。
- 圧力低下または不安定: 急速な圧力低下はほとんど常に漏れを示します.圧力がただ飛び回っている場合、ポンプに空気泡がある可能性があります。
HPLC 部品の系統的なトラブルシューティング
問題を解決するには、組織的な計画が必要です。システムの各部分を1つずつチェックします。
- モバイル フェーズ
これはあなたのシステムの生命の血です。また、非常に一般的な問題の原因です。
溶媒品質:常に高純度HPLC等級の溶媒から始めます.モバイルフェーズを新鮮にしてください。不不不不不不不不不不不不不不不不不不不不不不不不不不不不不要な信号、例えば、例えば、基線不不不不不不不不不不不不
pHとバッファの問題: モバイルフェーズのpHは安定して正しい必要があります.小さなシフトでも保持時間に大きな影響を与えることができます。また,バッファが完全に溶解され,使用前にフィルタリングされていることを確認してください.
脱ガス：小さなガスバブルは大きな問題を引き起こす可能性があります。それらは不安定な圧力と基準線のスパイクを引き起こします。組み込みのデガッシュ,ヘリウムのスパーギング,または超音波浴室に置くことで,移動相をよくデガスしてください.
- HPLC コラム
列はすべての分離作業を行います。その状態は重要です。
汚染と老化：コラムは使用とともに汚れます。サンプルの強く結合する部品はパッキングに粘ることができます。これは高い圧力と悪いピーク形を引き起こします。静止相も時間の経過とともに、特に非常に高いまたは低いpHで分解することができます。
インストールが悪い: 接続が悪い列が問題を引き起こす可能性があります.漏れか作成することができます“死体積”サンプルが広広いまたは分断されたピークにつながり、サササンプルがササササンプルがサササンプルがサササンプルがサササンプルがササンプリ
- ポンプおよび注入器
これらの部品は,安定した流れとクリーンなサンプルの導入を担当します.
ポンプシールとチェックバルブ: ポンプシールの磨損はしばしば漏れや圧力問題を引き起こします.故障のチェックバルブは不安定な流れを引き起こします。これにより、保存時間は信頼性が低くなります。
注入器および自動サンプラーの問題:注注入器の注注入器はピークを分断または尾を作ることができます。自動サンプラーでは、曲げられた針は注射を破壊することができます。それ’サンプルの運転を防ぐために良い洗い溶媒を使用することも重要です。
- 検出器 は
検出器’性能は質の高いデータを得るための鍵です。
ランプ性能：紫外線検出器では、古いランプが暗くなります。これはより多くのこれこれこれにより、探知器の感度が低下します。波長の校正も頻繁に確認する必要があります。
フローセルの問題: フローセルにフフラッピングされた空気バブルは,ベースラインで大きく,フフフローセルの急激なスパイクを作り出します.流れ細胞が汚れている場合、基線の漂移を起こすことができます。
信頼性の高いHPLC操作のための予防メンテナンス
定期的なメンテナンスは問題を防ぐための最良の方法です。機械が長く続くのに役立ちます。信頼できる結果も得ることができます。
予防メンテナンスチェックリスト:
毎日：溶媒レベルを毎日確認します。漏れを探し、システム圧力を見てください。バッファーを使用した後にシステムを洗うことも非常に重要です。
毎週：機械の外側をwipe down。検出器ランプ’をチェックして下さいit’かどうかを見るための性能s が暗くなる。
毎月：ポンプシールやインラインフィルターなどの消耗性部品を変更する計画を立てます。ダメージの兆候をチューブを見てください。
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結論
良いHPLC作業は科学と実践的なスキルの混合物です。論理的な計画に従うと、ほとんどの問題をすぐに解決できます。移動段階、次に柱、次にポンプと検出器を確認します。もっと重要なのは定期的なメンテナンスです。それ’驚くべきシャットダウンを避ける最良の方法です。この単純なコミットメントは,長期的に正確で繰り返し可能な結果を得るための最も重要な要因です.
よくある質問 (FAQ)
Q1: HPLCのピークテイルの最も一般的な原因は何ですか。
A: ピークテイルは,通常,アナライト (特に酸性または基性の場合) と,カラム内のシリカ材料の間の望ましくない相互作用によって起こります.現代的なエンドキャップのカラムを使用したり,モバイルフェーズのpHを調整したりすると,これはしばしば解決されます.もう一つの主要な理由は、サンプルをサササンプルをサササンプルをササササンプルをサササンプルをサササンプルをサササンプルをササンプールを
Q2：HPLCシステムのメンテナンスをどのくらい頻繁に行うべきですか？
A:これは実際にどのくらいそれを使用するかに依存します。忙しい実験室のために、it’毎日迅速なチェック（溶媒レベル、圧力）を行うのが良いアイデアです。毎週の検査を計画し,特にシステムが継続的に動作している場合,ポンプシールやフィルターなどの一般的な着用可能な部品を毎月交換します.
Q3: 溶媒が脱ガスされているにもかかわらず、ベースラインは漂流しています。原因は何だろうか。
A: モバイルフェーズが脱ガスされていることを確信している場合、次に確認するべきことは温度です。ドリフティングベースラインは、検出器または柱の周囲の温度変化によって引き起こされることが多い。オーブンの温度が安定していることを確認します。他の可能性には、“に始まる古い列が含まれています。出血”その静止相または汚い検出器の流れ細胞。
