أهداف التجربة
من خلال التجارب ، تعلم المبادئ الأساسية للتحليل الكروماتوغرافي والتشغيل الأساسي للأداة ، وفهم عملية تحليل البيانات.
تعرف على الأساليب الكمية الكروماتوغرافية ومقارنة مزايا وعيوب الأساليب المختلفة.
مقدمة HPLC
السرعة العالية: تستخدم HPLC معدات ضخ عالية الضغط ، ويزداد معدل التدفق بشكل كبير ، وسرعة التحليل سريعة للغاية ، فقط بضع دقائق بشكل عام ؛
كفاءة: جزيئات الحشو جيدة للغاية ومنتظمة ، والطلاء في المرحلة الثابتة موحدة ، ومقاومة نقل الكتلة صغيرة ، وبالتالي فإن كفاءة العمود مرتفعة للغاية.
حساسية عالية: الكاشف حساس للغاية: UV- 10-9G ، كاشف مضان- 10- 11g.
مقارنة HPLC مع GC
كائن ونطاق التحليل: يقتصر تحليل GC على الغازات والمركبات المستقرة منخفضة الغليان ، والتي تمثل 20 ٪ فقط من إجمالي المواد العضوية ؛
اختيار المرحلة المتنقلة: يستخدم GC أنواعًا اختيارية محدودة من الغازات "الخاملة" مثل المرحلة المتنقلة ، تحمل فقط تأثير صغير على المكونات.
درجة حرارة التشغيل: يتطلب GC درجات حرارة عالية ؛
حقول التطبيق
نظرًا لحساسيتها العالية ، والدقة الكمية ، ومناسبة لتحليل المكونات غير المتطايرة وغير المستقرة حرارياً ، فإن تحليل فصل HPLC متعدد الاستخدامات للغاية في الأبحاث الصناعية والعلمية ، وخاصة في علم الأحياء والطب.
يتكون HPLC من نظام المضخة ونظام الحقن ونظام الفصل ونظام معالجة البيانات ونظام معالجة البيانات.
نظام ضخ عالي الضغط
1) زجاجة الطور المتنقل: زجاجة زجاجية 1-2L مع مرشح المذيبات (سبيكة NI) ، تبلغ مسامها حوالي 2 ميكرون ، مما يمنع الجسيمات من الضخ.
2) Degasser: Degassing بالموجات فوق الصوتية أو التدفئة الفراغ.
3) مضخة الضغط العالي: متطلبات مضخة التسريب: ختم جيد ، تدفق مستقر دون تدفق ، نطاق قابل للتعديل على نطاق واسع ، ومقاومة التآكل.
تجربة
الظروف التجريبية
1) حقن المحاليل القياسية 10 ميكرولتر (ميثيل بارابين ، بروبيل بارابين ، وبوتيل بارابين) في مراحل مختلفة من الميثانول: الماء = 90:10 ، 80:20 ، و 70:30 لاختبار وقت الاحتفاظ بوقت الاختيار والقرار بين مختلف مكونات المتنقل.
ملاحظة: في كل مرة تقوم فيها بتغيير مرحلة الهاتف المحمول ، تحتاج إلى الانتظار حوالي 5 دقائق لتحقيق التوازن بين نظام الكروماتوغرافيا (كل من خطوط الإشارة والضغط متوازنة).
2) حقن 10 ميكرولتر من الحلول القياسية (الميثيل بارابين ، البارابين البروبيل ، وبوتيل بارابين) بمعدلات مختلفة لتدفق المرحلة المتنقلة من 0.8 ، 1.0 ، و 1.5 مل {{url_placeholder_0}} وتحليل حقن مرحلة الجوال الأمثل ، نفس المبدأ المحدد معدل تدفق الطور المتنقل.
التحليل النوعي
في ظل الظروف التجريبية المثلى ، يتم حقن 10 ميكرولتر لكل من البارابين الميثيل ، وبارابين بروبيل ، وبوتيل بارابين ووقت الاحتفاظ بكل قمة.
التحليل الكمي
منحنى المعايرة
في ظل الظروف التجريبية المثلى ، تم حقن وتحليل 2 و 5 و 8 و 10 و 15 و 20 ميكرولتر من العينة القياسية المختلطة ، ويتم إنشاء المنحنى القياسي حسب حجم الحقن ومنطقة الذروة.
مطلوب أن يكون معامل الارتباط لهذا المنحنى أكبر من 0.99.
تحليل عينة غير معروف
حقن 10 ميكرولتر عينة غير معروفة للاختبار ، والتحليل الكمي عن طريق منحنى المعايرة.
أسئلة
بناءً على البيانات التجريبية ، ناقش الاختلافات في طرق التحليل بين كروماتوجرافيا الغاز واللوني السائل.
استكشف قيمة التطبيق لتحليل HPLC.
ما إذا كان كاشف الأشعة فوق البنفسجية مناسبًا للكشف عن جميع المركبات العضوية؟
