أخبار

يعمل الكروماتوغرافيا باستبعاد الحجم (SEC) ، المعروفة أيضًا باسم الكروماتوغرافيا التخلصية بالهلام (GPC) ، كطريقة تحليلية رئيسية لفرز الجزيئات الكبيرة بحكم حجمها الهيدروديناميكي بحتة. تعتمد الفكرة الرئيسية على الاختلافات الفيزيائية ، وليس الكيميائية: يتم فصل الجسيمات من خلال استبعاد مختلف من الإعداد المسامي للمرحلة الثابتة. الجسيمات الكبيرة تخرج أولاً لأنها لا تستطيع دخول المسام في المرحلة الثابتة. وفي الوقت نفسه، تنزلق الجسيمات الأصغر إلى هذه المسام وتتحرك ببطء أكبر على طول العمود. هذا يؤدي إلى أوقات أطول قبل الخروج.

هذا النهج يعطي SEC فوائد خاصة عند دراسة البوليمرات والبروتينات والأجسام المضادة والجسيمات النانوية. فهي تفعل ذلك دون تغيير شكلها الطبيعي أو الحاجة إلى أي روابط كيميائية. كما لاحظ هيلد وكيلز، "الكروماتوغرافيا باستبعاد الحجم هي أهم تقنية توصيف للجزيئات الكبيرة".

ما هي المعلمات الحرجة لدقة التحليل في SEC؟

تحتاج إلى اختيار المرحلة المتنقلة بعناية كبيرة للحفاظ على العينة في حالة جيدة. المكياج من المؤقت العازل لديه لدعم العينة’ s الاستقرار ووقف أي الالتزامات غير المرغوب فيها. على سبيل المثال ، تتفاعل البروتينات بقوة مع قوة الأيونات ومستوى درجة الحموضة. هذه العوامل تشكل بشكل مباشر شكلها وكيفية امتصاكها في العمود. إضافة بعض المضافات العضوية يمكن أن تقلل من الآثار الهيدروفوبية اللاصقة. وهذا مفيد بشكل خاص عند العمل مع البوليمرات البيولوجية.

لماذا يجب تحسين معدل التدفق لأفضل دقة؟

معدل التدفق يلعب دورا رئيسيا في كل من حدة الفصل وسرعة العملية. تقلل التدفقات الأسرع من الوقت اللازم للتحليل ، لكنها قد تضر بوضوح الفصل. يحدث هذا في الغالب بالنسبة للجسيمات القريبة من حد الاستبعاد. من ناحية أخرى، تدفقات أبطأ تعزز نوعية الفصل ولكن تسحب إجمالي الوقت. لذلك ، يجب عليك العثور على أرض وسط جيدة. وبهذه الطريقة، يمكنك الحصول على نتائج تحليلية قوية دون فقدان الكفاءة.

ما مدى أهمية المعايرة في تقدير الوزن الجزيئي؟

SEC نفسها لا تعطي الأوزان الجزيئية الدقيقة. بدلاً من ذلك ، تخمن باستخدام منحنيات مصنوعة من عينات قياسية. من خلال المعايرة مع المعايير المعروفة، يمكنك ربط أحجام الإفلات بالأوزان الجزيئية. ينطبق هذا بشكل خاص عند تطبيق أساليب المعايرة الواسعة، مثل معادلة غروبيس.

كيف يمكن تطبيق SEC لتحسين دقة التحليل عبر أنواع العينات المختلفة؟

في نمو الأدوية الحيوية ، يبرز اكتشاف كتل البروتين كفحص جودة حيوي. تقوم SEC بتجميع مجموعات ذات وزن جزيئي عالي ذات أهمية كبيرة في التحكم في جودة الأدوية الحيوية. فإنه يحلل المونومرات من أزواج أو مجموعات أكبر، مما يساعد على تقييم مدى استقرار البروتينات تحت إعدادات مختلفة. بالإضافة إلى ذلك ، من خلال القياس الدقيق ، فإنه يفرق بين الأشكال الفردية الرئيسية والبتات المكسورة.

ما هي الفوائد التي تقدمها SEC للجسيمات النانوية والمتزوجات الحيوية؟

الجسيمات النانوية والمترابطات الحيوية تجلب مشاكل صعبة بسبب تكوينها المتنوع. سيك تلمع في هذه المنطقة لأنها تصنفها حسب نصف قطرها الهيدروديناميكي. على وجه الخصوص، فإنه يقسم الجسيمات النانوية حسب نصف قطرها الهيدروديناميكي، مما يساعد في التحقق من مساواة الحجم. بالنسبة لأشياء مثل متزاوجات الأجسام المضادة والدواء أو البروتينات المرتبطة بـ PEG ، يمكن أن تميز الإصدارات المرتبطة عن الإصدارات غير المرتبطة.

ما هي العوامل الأدوية التي يجب النظر فيها في إعدادات SEC عالية الدقة؟

يعتمد اختيار العمود على النطاق المتوقع من الأوزان الجزيئية ومدى تطابقه كيميائياً. يجب أن تناسب الأعمدة نطاق الوزن الجزيئي المتوقع لتحقيق أفضل وضوح ممكن. وعلاوة على ذلك، فإن الإعدادات المخصصة للأنظمة القائمة على المياه تعمل بشكل أفضل للبروتينات والبوليسكاريدات. على النقيض من ذلك ، فإن الأعمدة التي تتعامل مع المذيبات العضوية تناسب البوليمرات الصناعية مثل PMMA أو البوليستيرين. كما يلعب طول وعرض العمود في حدة الفصل ومقدار العينة التي يمكن التعامل معها في وقت واحد.

أي كاشفات تضيف قيمة لتفسير SEC؟

غالبا ما تتعاون SEC مع أجهزة كشف مختلفة لجعل النتائج أسهل فهمها:

مؤشر الانكسار (RI): يوفر هذا الكشف الواسع عن البوليمرات والكربوهيدرات والبروتينات التي تفتقر إلى أجزاء امتصاص الألوان.

الأشعة فوق البنفسجية / فيس: يسمح بالكشف المستهدف باستخدام الطريقة التي تمتص بها العينات الضوء.

MALS: يعطي هذا الأوزان الجزيئية الحقيقية دون الحاجة إلى عينات قياسية للمعايرة.

تشغيل هذه معا يسمح لك بجمع البيانات في نفس الوقت. ونتيجة لذلك، يربط مستويات التركيز بالسمات الهيكلية، مما يسمح بالانهيار الكامل من عملية اختبار واحدة فقط. هذا النهج المشترك يعزز بشكل كبير موثوقية البيانات التي تحصل عليها.

من يمكنه توفير حلول أجهزة SEC موثوقة ومبتكرة؟

إذا كنت تريد أن تجلب SEC إلى مختبرك بدقة ومرونة من الدرجة الأولى، برسي يقدم مجموعة متميزة من أدوات الكروماتوغرافيا المصممة لكل من مختبرات البحث والإعدادات الصناعية. تأسست كشركة عالية التكنولوجيا تركز على الأدوات العلمية في عام 1991 ، ظلت PERSEE مخلصة للدفع للأمام في مجالات مثل HPLC ، GC ، FTIR، الأشعة فوق البنفسجية / الفيس الطيفية ، و الطيفية الذريةتركيزهم القوي على البحوث يظهر بوضوح أن أكثر من 30٪ من الموظفين يعملون في مجال البحث والتطوير. د، دائما تحسين المنتجات لتلبية ما يحتاجه المستخدمون كما تتغير الأمور مع مرور الوقت.

في إطار صفوفهم، فإن L600 نظام الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء حقا يبرز. البناء الصلب يجعله مثاليًا لمهام SEC المفصلة. يضمن النظام التحكم الدقيق في التدفق ، وهو أمر حاسم للحصول على نتائج قابلة للتكرار في الفصل بناء على الحجم الجزيئي. بالإضافة إلى ذلك، يساعد PERSEE العلماء في جميع أنحاء العالم بمساعدة عملية في الإعداد والتدريب والصيانة. يقومون بذلك من خلال شبكة متينة من الموزعين في جميع أنحاء العالم ، مما يجعل الدعم سهل الوصول بغض النظر عن مكانك.

كيف تساهم SEC في الدقة التحليلية عبر الصناعات؟

SEC’ المهارة في تفريق الجزيئات فقط بحجمها ، مع الحفاظ على الظروف الأصلية ، تحولها إلى أداة أساسية للتحقق من النقاء. ويكتشف بشكل موثوق الاختلافات بين أنواع جزيئية مختلفة ، مما يعزز قوة فحص النقاء بطرق عديدة. تظهر SEC فائدتها الواسعة النطاق من وصف البوليمرات في علوم المواد ، إلى العثور على مجموعات في الأدوية الحيوية ، وحجم الجسيمات النانوية في الطب النانوي. يتناسب بسلاسة مع العديد من المجالات ، بما في ذلك الأدوية وعلوم المواد والتكنولوجيا الحيوية. في جميع هذه المجالات ، تتعامل مع الاحتياجات المتنوعة بأداء متسق ، وتتكيف مع التحديات المحددة في كل منها مع الحفاظ على معايير عالية من الدقة والموثوقية. ربط SEC مع أدوات مثل MALS أو الأشعة فوق البنفسجية يأخذ قدرتها على قياس الكميات إلى مستوى أعلى. هذا الاقتران يعزز موثوقية الأرقام التي تحصل عليها.

أسئلة متكررة

Q1: كيف تختلف الكروماتوغرافيا باستبعاد الحجم عن الكروماتوغرافيا الأخرى تقنيات؟
A1: على عكس تبادل الأيونات أو الكروماتوغرافيا في المرحلة العكسية التي تعتمد على التفاعلات الكيميائية، تفصل SEC التحليلات فقط بناء على حجمها الهيدروديناميكي باستخدام مصفوفة مسامية.

س2: ما هي التحديات الشائعة في تحقيق نتائج دقيقة باستخدام SEC؟
A2: تشمل التحديات تفاعلات غير محددة مع المرحلة الثابتة، ومعايير المعايرة غير المناسبة للعينات المعقدة، ومعدل التدفق دون المثالي أو ظروف المرحلة المتنقلة.

Q3: يمكن استخدام الكروماتوغرافيا استبعاد الحجم لكل من الماء والعضوي أنظمة؟
A3: نعم ، اعتمادا على المواد المستخدمة في المرحلة الثابتة ؛ الأعمدة المتوافقة المائية مناسبة للبروتينات والبوليسكاريدات في حين تستخدم الأعمدة المتوافقة العضوية للبوليمرات الصناعية مثل البوليستيرين أو PMMA.