الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) هي أداة رئيسية للعلماء. يسمح لهم بفصل وتحديد وقياس الأجزاء المختلفة من الخليط. تعتمد التقنية على كيفية تفاعل جزيئات العينة مع السائل (المرحلة المتنقلة) والصلب (المرحلة الثابتة). يعرف HPLC بإعطاء نتائج دقيقة ومستقرة. وهذا يجعلها حاسمة في العديد من المجالات، من الأدوية إلى سلامة الأغذية. ولكن الحصول على جودة البيانات هو’ t مُعْطَى. يتطلب نظام HPLC جيد الصيانة يعمل بأفضل طريقة ممكنة.
يقدم هذا الدليل خطة خطوة بخطوة بسيطة للعثور على المشاكل الشائعة وحلها. سيساعدك اتباع هذه النصائح على الحصول على بيانات أفضل وتحسين نظامك ’ الأداء الكلي.
المشاكل الشائعة في عملية HPLC
معرفة علامات المشكلة هي الخطوة الأولى لإصلاحها.
ضوضاء خط الأساس والانزهار: قد يظهر خط الأساس الخاص بك ذرات عشوائية (ضوضاء) أو منحدر بطيء ومستقر (الانجراف). هذا يمكن بسهولة إخفاء القمم الصغيرة. كما يجعل الحصول على نتائج دقيقة أكثر صعوبة بكثير. الأسباب المعتادة هي مرحلة متنقلة قذرة ، وتقلبات درجة الحرارة ، أو مصباح كاشف ضعيف.
تحولات وقت الاحتفاظ: قد يخرج المركب في وقت مبكر أو آجل مما هو متوقع. هذا التناقض يجعل من الصعب تكرار النتائج. هذا’ في كثير من الأحيان بسبب تغييرات طفيفة في المرحلة المتنقلة ، أو عمود قديم ، أو مضخة غير مستقرة ، أو تغييرات درجة الحرارة.
- شكل ذروة سيئة (التذليل ، واجهة ، تقسيم):
- الذيل: قمم الذيل لها نهاية طويلة ومميلة. يمكن أن يحدث هذا لسببين رئيسيين. قد تكون حقن الكثير من العينة ، أو المركبات الخاصة بك تلتصق بتعبئة العمود.
- الجبهة: تتطلع قمم الجبهة إلى الأمام. هذه علامة شائعة على أن المذيب عينتك أقوى بكثير من مرحلتك المتنقلة.
- تقسيم: تبدو القمم المقسمة مثل قمتين دمجتا في واحدة. وهذا يشير إلى مشكلة. يمكن أن يكون مدخل عمود مسدود جزئيا ، أو فراغ في تعبئة العمود ، أو حقن سيء.
- تقلبات الضغط والحصارات:
- ارتفاع مطرد وبطيء: غالبا ما يشير هذا إلى انسداد تدريجي. قد تتراكم الجسيمات الصغيرة من عينتك في الجزء الأمامي من العمود أو على فلتر.
- ارتفاعات ضغط مفاجئة: عادة ما تعني قفزة حادة في الضغط أن انسداد كبير حدث للتو.
- انخفاض الضغط أو عدم الاستقرار: انخفاض الضغط السريع تقريبا دائما يشير إلى تسرب. إذا كان الضغط يقفز فقط ، فمن المحتمل أن يكون لديك فقاعات الهواء في المضخة.
إصلاح المشاكل المنهجية لمكونات HPLC
لحل المشكلة بشكل جيد ، تحتاج إلى خطة منظمة. تحقق من كل جزء من النظام واحد تلو الآخر.
- المرحلة المحمولة
هذا هو الدم الحيوي لنظامك. وهو أيضا مصدر شائع جدا للمشاكل.
جودة المذيبات: ابدأ دائما مع المذيبات عالية النقاء، درجة HPLC. جعل مراحلك المحمولة جديدة. تؤدي الشوائب إلى إشارات إضافية غير مرغوب فيها مثل ضوضاء خط الأساس أو قمم الأشباح.
مشاكل درجة الحموضة والمعازلة: يجب أن يكون درجة الحموضة في المرحلة المحمولة مستقرة وصحيحة. حتى التحولات الصغيرة يمكن أن تؤثر بشكل كبير على أوقات الاحتفاظ. أيضا، تأكد من أن أي مخازن ذابة بالكامل وتصفية قبل الاستخدام.
إزالة الغاز: يمكن لفقاعات الغاز الصغيرة أن تسبب مشاكل كبيرة. إنها تؤدي إلى ضغط غير مستقر و ارتفاعات في خط الأساس الخاص بك. تأكد من إزالة الغاز من المرحلة المتنقلة بشكل جيد مع إزالة الغاز المدمجة ، أو إزالة الهيليوم ، أو عن طريق وضعها في حمام بالموجات فوق الصوتية.
- عمود HPLC
العمود يقوم بكل أعمال الفصل. حالته حرجة.
التلوث والشيخوخة: تتقذر الأعمدة مع الاستخدام. أجزاء ملزمة قوية من عينتك يمكن أن تلتصق بالتعبئة. هذا يسبب ضغط أعلى وأشكال ذروة ضعيفة. المرحلة الثابتة يمكن أن تتكسر أيضا مع مرور الوقت، وخاصة عند درجة الحموضة عالية جدا أو منخفضة.
التثبيت السيئ: يمكن لعمود متصل بشكل سيء أن يسبب مشاكل. يمكن تسرب أو إنشاء “ أحجام ميتة” حيث يمكن للعينة أن تتعلق ، مما يؤدي إلى قمم واسعة أو مقسمة.
- المضخة والحقن
هذه الأجزاء مسؤولة عن تدفق ثابت وإدخال عينة نظيفة.
اختتامات المضخة وصمامات التحقق: غالبا ما تسبب اختتامات المضخة الملبوسة تسريبات ومشاكل الضغط. صمامات التحقق المعيبة تؤدي إلى تدفق غير مستقر. هذا يجعل أوقات الاحتفاظ الخاصة بك غير موثوقة.
مشاكل المحقن و Autosampler: يمكن للحقن القذر أن يجعل القمم تقسيم أو ذيل. مع العينات الآلية ، يمكن لإبرة منحنية أن تفسد الحقن. هذا’ s أيضا حيوية لاستخدام المذيب الغسيل الجيد لمنع نقل العينة.
- الكاشف
الكاشف’ الأداء هو المفتاح للحصول على بيانات عالية الجودة.
أداء المصباح: في كاشفات الأشعة فوق البنفسجية ، يصبح المصباح القديم ضعيفًا. هذا يضيف المزيد من الضوضاء ويجعل الكاشف أقل حساسية. يجب عليك أيضًا التحقق من معايرة الطول الموجي في كثير من الأحيان.
مشاكل خلايا التدفق: فقاعة الهواء المحاصرة في خلية التدفق تخلق ذرات كبيرة وحادة على خط الأساس. إذا كانت خلية التدفق قذرة، فإنه يمكن أن تجعل الانجراف خط الأساس.
الصيانة الوقائية لعملية HPLC موثوقة
الصيانة المنتظمة هي أفضل طريقة لمنع المشاكل. يساعد جهازك على استمرار فترة أطول. كما يضمن لك الحصول على نتائج يمكنك الثقة بها.
قائمة التحقق من الصيانة الوقائية:
كل يوم: تحقق من مستويات المذيبات يوميا. ابحث عن التسريبات ومراقبة ضغط النظام. من المهم أيضًا تنظيف النظام بعد استخدام المخازن لمنع تراكم الملح.
كل أسبوع: مسح خارج الجهاز. تحقق من مصباح الكاشف’ أداء s لمعرفة ما إذا كان’ s الحصول على ضبابية.
كل شهر: ضع خطة لتغيير الأجزاء المستهلكة، مثل ختمات المضخة والمرشحات الداخلية. انظر إلى الأنابيب لأي علامات على الضرر.
معرفة شركة PERSEE: مصنع موثوق به للأدوات التحليلية
في سوق صعبة، تجعل المعدات المناسبة كل الفرق. برسي هو شريك موثوق يقدم حلول تحليلية قوية. مع التركيز الواضح على الأفكار الجديدة، يجمع بيرسي بين التصنيع المتقدم والبحث والتطوير المخصص. فريق د. هذا يضمن كل أداة يوفر أعلى أداء وموثوقية.
خط منتجاتهم يظهر هذا التفاني. مثال رائع هو التنوع L600 نظام الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء. تم تصميم L600 للعمل العملي والمختبري اليومي. لديه واجهة سهلة الاستخدام وتصميم وحدات، بحيث يمكن أن تنمو مع احتياجاتك. الأجهزة الصلبة مناسبة للعديد من الاستخدامات ، من تحليل الأدوية إلى اختبار سلامة الأغذية.
خاتمة
عمل HPLC جيد هو مزيج من العلوم والمهارات العملية. من خلال اتباع خطة منطقية ، يمكنك حل معظم المشاكل بسرعة. تحقق من المرحلة المتنقلة، ثم العمود، ثم المضخة والكاشف. والأهم من ذلك هو الصيانة المنتظمة. هذا’ أفضل طريقة لتجنب الإغلاق المفاجئ. هذا الالتزام البسيط هو أهم عامل للحصول على نتائج دقيقة وقابلة للتكرار على المدى الطويل.
الأسئلة الشائعة (FAQs)
Q1: ما هو السبب الأكثر شيوعا من الذيل ذروة في HPLC؟
ج: عادة ما يحدث الذروة بسبب التفاعلات غير المرغوب فيها بين محللاتك (خاصة إذا كانت حمضية أو أساسية) ومواد السيليكا في العمود. استخدام عمود حديث مغطى أو تعديل درجة الحموضة في المرحلة المتنقلة غالباً ما يحل هذا. سبب رئيسي آخر هو حقن الكثير من العينة ، والتي يمكن إصلاحها عن طريق تخفيف عينتك.
س2: كم مرة يجب أن أجري الصيانة على نظام HPLC الخاص بي؟
ج: هذا يعتمد حقا على كم تستخدمه. لأي مختبر مشغول ، فإنه ’ فكرة جيدة للقيام بفحوصات سريعة يوميا (مستويات المذيبات والضغط). تخطط لفحوصات أسبوعية واستبدل الأجزاء الشائعة القابلة للارتداء مثل ختمات المضخة والمرشحات شهريًا ، خاصة إذا كان النظام يعمل باستمرار.
Q3: خط الأساس الخاص بي ينجراف على الرغم من إزالة الغاز من المذيبات الخاصة بي. ما الذي يمكن أن يكون السبب؟
ج: إذا كنت متأكدًا من أن مرحلتك المتنقلة قد تم إزالة الغاز ، فإن الشيء التالي الذي يجب التحقق منه هو درجة الحرارة. غالبا ما يكون سبب انجراف خط الأساس هو تغيرات درجة الحرارة حول الكاشف أو العمود. تأكد من أن درجة حرارة فرن العمود مستقرة. تشمل الاحتمالات الأخرى عمود قديم يبدأ “ نزيف” مرحلته الثابتة أو خلية تدفق الكاشف القذرة.
