Obiettivi sperimenta
\nPer esperimenti, impara i principi di base dell'analisi cromatografica e il funzionamento di base dello strumento e comprendi il processo di analisi dei dati.
\nScopri i metodi quantitativi cromatografici e confronta i vantaggi e gli svantaggi di diversi metodi.<\/p>\n
Introduzione HPLC
\nAlta velocit\u00e0: HPLC utilizza apparecchiature di infusione ad alta pressione, la portata \u00e8 notevolmente aumentata e la velocit\u00e0 di analisi \u00e8 estremamente veloce, solo pochi minuti in generale;
\nEfficiente: le particelle di riempimento sono molto fini e regolari, il rivestimento sulla fase stazionaria \u00e8 uniforme e la resistenza al trasferimento di massa \u00e8 piccola, quindi l'efficienza della colonna \u00e8 molto elevata.
\nElevata sensibilit\u00e0: il rivelatore \u00e8 estremamente sensibile: UV- 10-9g, rilevatore di fluorescenza- 10- 11g.<\/p>\n
Confronto HPLC con GC<\/p>\n
Oggetto e ambito di analisi: l'analisi GC \u00e8 limitata ai gas e ai composti stabili a basso consumo, che rappresentano solo il 20% della materia organica totale;<\/p>\n
La scelta della fase mobile: GC utilizza tipi opzionali limitati di gas \"inerte\" come fase mobile, portano solo un piccolo effetto sui componenti.<\/p>\n
Temperatura operativa: GC richiede temperature elevate;
\nCampi di applicazione
\nA causa della sua elevata sensibilit\u00e0, accuratezza quantitativa e adatta all'analisi di componenti non volatili e termicamente instabili, l'analisi di separazione HPLC \u00e8 estremamente versatile nella ricerca industriale e scientifica, specialmente in biologia e medicina.<\/p>\n
HPLC \u00e8 costituito dal sistema di pompe, sistema di iniezione, sistema di separazione, rivelatore e sistema di elaborazione dei dati.<\/p>\n
Sistema di infusione ad alta pressione
\n1) Bottiglia di fase mobile: bottiglia di vetro da 1-2L con filtro solvente (lega NI), i suoi pori sono di circa 2 \u03bcm, impedendo il pompaggio delle particelle.
\n2) Degasser: degasaggio ad ultrasuoni degassanti o riscaldamento sotto vuoto.<\/p>\n
3) Pompa ad alta pressione: i requisiti per la pompa di infusione: buona tenuta, flusso stabile senza afflusso, ampio intervallo regolabile e resistenza alla corrosione.<\/p>\n
Sperimentare<\/p>\n
Condizioni sperimentali
\n1) Iniettare soluzioni standard di miscelazione da 10 \u03bcl (metil paraben, propil paraben e butil paraben) in diverse fasi mobili del metanolo: acqua = 90:10, 80:20 e 70:30 per testare, il tempo di ritenzione dei record e la risoluzione tra i vari componenti, con la risoluzione maggiore di 1,5 e il tempo pi\u00f9 breve di selezione della reazione mobile.
\nNota: ogni volta che si modifica la fase mobile, \u00e8 necessario attendere circa 5 minuti per bilanciare il sistema cromatografico (sia le linee di segnale che quella di pressione sono bilanciate).
\n2) Iniettare soluzioni standard di miscela da 10 \u03bcl (metil paraben, propy paraben e butil paraben) a diverse portate di fase mobile di 0,8, 1,0 e 1,5 ml {{url_placeholder_0}} e analisi di iniezione di fase mobili ottimali, lo stesso principio ha selezionato la migliore portata del flusso di fase mobile.<\/p>\n
Analisi qualitativa
\nNelle condizioni sperimentali ottimali, inietta 10 \u03bcl di metil paraben, propil paraben e butil paraben e il tempo di ritenzione di ciascun picco viene registrato.<\/p>\n
Analisi quantitativa
\nCurva di calibrazione
\nNelle condizioni sperimentali ottimali, 2, 5, 8, 10, 15 e 20 \u03bcL del campione standard misto sono stati iniettati e analizzati e la curva standard \u00e8 stabilita dal volume di iniezione e dall'area di picco.
\n\u00c8 necessario che il coefficiente di correlazione di questa curva sia maggiore di 0,99.<\/p>\n
Analisi del campione sconosciuta
\nIniettare campioni sconosciuti da 10 \u03bcL da testare, analisi quantitativa mediante curva di calibrazione.<\/p>\n
Domande
\nSulla base dei dati sperimentali, discutere le differenze nei metodi di analisi tra gascromatografia e cromatografia liquida.
\nEsplora il valore dell'applicazione dell'analisi HPLC.
\nSe il rivelatore UV \u00e8 adatto per rilevare tutto il composto organico?<\/p>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"
Experiment Objectives By experiments, learn the basic principles of chromatographic analysis and the basic operation of the instrument, and understand the process of data analysis. Learn about chromatographic quantitative methods and compare the advantages and disadvantages of different methods. HPLC Introduction High speed: HPLC uses high-pressure infusion equipment, the flow rate is greatly increased, and […]<\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":3315,"comment_status":"open","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"footnotes":""},"categories":[76],"tags":[],"class_list":["post-2720","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-education"],"acf":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.pgeneral.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/2720","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.pgeneral.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.pgeneral.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.pgeneral.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.pgeneral.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=2720"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.pgeneral.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/2720\/revisions"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.pgeneral.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/media\/3315"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.pgeneral.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=2720"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.pgeneral.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=2720"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.pgeneral.com\/it\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=2720"}],"curies":[{"name":"WP","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}